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        今天普拉特澤生物來跟大家一起學習動物細胞的培養，本單元應大家關于細胞培養傳代冷凍復蘇的各種技術問題而出。普拉特澤細胞實驗平臺專業承接原代細胞分離、培養、誘導分化等細胞實驗的各種基礎準備工作，經手操作大量的生物細胞資源，總結出一套簡單適合大多數動物細胞分離與培養傳代的經驗，一起來看看吧！

        動物細胞培養（animal cell culture）就是從動物機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）然后，放在適宜的培養基中，讓這些細胞生長和增殖。

        我們常見的動物細胞培養種類主要分為，原代細胞培養與傳代細胞培養，今天我們來看看原代細胞培養的詳細步驟！

        原代細胞培養是指將動物各種組織從機體中取出，經各種胰蛋白酶、螯合劑或機械方法處理，分散成單細胞，在合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。培養的細胞為正常的動物細胞，一般培養10代后不再增殖，死亡。

        我們培養動物的原代細胞主要分為取材、漂洗、剪切、消化、制備單細胞懸液、接種、培養等步驟，咱們一個一個看（以小白鼠為例）：

        1、待培養細胞組織取材

        頸椎脫臼法處死小白鼠，放在100ml的燒杯中用70%乙醇消毒3min。用剪刀剪開腹部，取出腎、肝、脾(任意一種臟器)。

        （1）將小白鼠斷頸處死，然后用75%酒精或1%新潔爾滅浸泡消毒，迅速進入無菌室。

        （2）將小白鼠置超凈工作臺上，打開腹腔

        2、清洗組織

        在盛有PBS緩沖液平皿中洗滌數次，剔除包膜、結締組織，將剔除后的臟器放入另一個盛有PBS的平皿中。

        3、剪切組織

        將腎、肝、脾剪成1mm3(剪成肉末狀)大小的組織塊，再次清洗，洗去殘留的血細胞，以備消化。

        4、消化組織

        （1）在50 ml離心筒中加入0.25%胰蛋白酶溶液25ml在溫暖的環境中或置于37°水浴搖床中輕輕搖動15 min，轉速約為180r/min。

        （2）讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細胞的液體轉移至一無菌50 ml的離心管中，該管內按照每10 ml上清加入Im小牛血清的比例加入生血清以滅活胰蛋白酶。(小牛血清在共用無菌操作臺上取用)

        （3）在離心管中殘留未消化組織塊中再次加入胰蛋白酶進行消化，重復以上1和2步驟。

        5、制備單細胞懸液

        （1）將混合的細胞懸液離心，1200 rpm，5 min，棄上清。

        （2）將沉淀用新鮮的無菌PBS重懸，再1000-1200 rpm，5 min離心。

        （3）用PBS反復洗滌細胞直至上清清亮為止，然后再按照第一步進行離心，離心后棄去上清液，將沉淀用少量細胞培養液反復吹打，制成細胞懸液。

        6、細胞接種

        （1）將細胞懸液接種到細胞培養瓶中。

        （2）用濾器過濾細胞培養液再懸沉淀，并使終體積為20 ml。

        7、細胞培養

        （1）在培養瓶外做好標記(標明所培養細胞的名稱和時間)，

        （2）置于CO?的孵箱中培養，

        （3）72h后即可觀察。

        好啦，那關于動物細胞培養的原代細胞分離與培養步驟我們就介紹到這里啦，當然不一定所有的細胞培養步驟都一模一樣，有一些要用特定的培養基與培養條件，如果有不懂的實操問題或有細胞實驗需外包與代做，可以隨時給客服留言，普拉特澤的技術會第一時間給到您回復的哦！