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巨噬細(xì)胞流式檢測方法【巨噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包】

2022-11-18 15:07:10

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)

        巨噬細(xì)胞流式檢測方法由普拉特澤生物流式檢測平臺(tái)為大家分享。巨噬細(xì)胞是先天免疫系統(tǒng)的一種特殊的、長壽命的吞噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞是三種吞噬細(xì)胞類型之一,還有粒細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞)和樹突狀細(xì)胞(DCs)。

        一般來說,巨噬細(xì)胞可根據(jù)其功能和活化程度分為兩個(gè)亞型:經(jīng)典激活的M1巨噬細(xì)胞和交替激活的M2巨噬細(xì)胞;極化的這種性質(zhì)表示頻譜的相對(duì)兩端,僅指在給定的時(shí)間和位置上的激活。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了M1巨噬細(xì)胞具有與對(duì)細(xì)菌和細(xì)胞內(nèi)病原體的免疫反應(yīng)相關(guān)的促炎作用。另一方面,M2具有更多的抗炎作用,在血管生成和傷口愈合中具有相關(guān)功能。M2還與2T輔助反應(yīng)(Th2)有關(guān),例如蠕蟲免疫、哮喘和過敏。

        M1型巨噬細(xì)胞表達(dá)MHC II、CD80、CD86CD16/32,分泌TNF-α、IL-6IL-12等促炎因子,以及CXCL9CXCL10CXCL11等趨化因子。另外,M2型巨噬細(xì)胞高表達(dá)arginase-1(Arg1)CD206,分泌抗炎因子IL-10以及CCL2、CCL17CCL22等趨化因子(如下圖)。

                                  



        (文中部分內(nèi)容摘自賽默飛 賽默飛生命科學(xué))

        腹腔中M1M2型巨噬細(xì)胞流式染色實(shí)例

        Mouse (腹腔貼壁細(xì)胞): M1M2型巨噬細(xì)胞

        1.標(biāo)志物:

        M1: F4/80+CD11b+CD86+ cells;M2: F4/80+CD11b+CD206+cells;

        2. 流式細(xì)胞儀:Beckman CoulterCytoFLEX;

        3.流式抗體及用量:

        PE anti-mouse CD86 (1μg/test105007,BioLegend);APC anti-mouse CD206 (0.5μg/test141707,BioLegend);PerCP-Cy5.5 anti-mouseCD11b (0.25μg/test,101227,BioLegend);

        AF488 anti-mouse F4/80 (1μg/test,123119BioLegend);

        4.染色條件:首先FcRblock孵育(1μg/test101319;BioLegend),4℃,5-10min; 接著F4/80、CD11bCD86表面染色, 4℃,30min;

        5.細(xì)胞固定:PBS洗滌細(xì)胞2~3次,加入細(xì)胞固定液(Fixation Buffer,500ul420801,BioLegend)室溫避光固定30min。

        6.細(xì)胞膜通透:150g離心5min棄掉固定液,加入2mlddH2O 10倍稀釋后的10×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer421002,BioLegend)重懸細(xì)胞,150g離心5min棄上清,重復(fù)步驟2~3次。

        7.胞內(nèi)染色:100μL1×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer重懸細(xì)胞,加入CD206抗體(0.5μg/tests,141707,BioLegend),室溫避光孵育30min。孵育完畢后,2ml1×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer洗滌細(xì)胞2~3次,加入500μL cell staining buffer重懸細(xì)胞,上機(jī)。

        8.分析軟件:Flowjo (10.0.7)

        9. 圈門策略及染色: (見下圖)

        如果您也需要用流式檢測巨噬細(xì)胞的話歡迎隨時(shí)聯(lián)系我們的技術(shù),普拉特澤生物隨時(shí)在線~