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什么是亞硫酸氫鈉測序?【甲基化檢測外包】

2022-11-18 15:47:24

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺

  亞硫酸氫鈉測序法BSP)實(shí)驗介紹由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享。亞硫酸氫鹽測序是檢測細(xì)胞或組織中全部染色體DNA上甲基化情況的技術(shù)。普拉特澤生物表達(dá)檢測平臺專業(yè)提供亞硫酸氫鈉測序?qū)嶒炌獍?wù),本文我們先來看看亞硫酸氫鈉測序法的實(shí)驗介紹~

  亞硫酸氫鈉測序法(BSP)是基于亞硫酸氫鹽能使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不變,行PCR擴(kuò)增所需片段,則尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶,然后對PCR產(chǎn)物進(jìn)行高通量測序。通過分析不同樣品之間的甲基化差異,可研究DNA甲基化水平對基因表達(dá)的調(diào)控

  直接測序法是建立在 MSP 基礎(chǔ)上進(jìn)一步深入研究 CpG 島各個位點(diǎn)甲基化情況的方法重亞硫酸鹽使 DNA 中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶而甲基化的胞嘧啶保持不變PCR 擴(kuò)增(引物設(shè)計時盡量避免有 CpG以免受甲基化因素的影響)所需片段則尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶最后PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序并且與未經(jīng)處理的序列比較判斷是否CpG位點(diǎn)發(fā)生甲基化

  亞硫酸氫鈉測序法一種可靠性及精確度很高的方法能明確目的片段中每一個 CpG 位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)在尋找有意義的關(guān)鍵性 CpG 位點(diǎn)上有其他方法無法比擬的優(yōu)點(diǎn)測序法以 CpG 島兩側(cè)不含 CpG 點(diǎn)的一段序列為引物配對區(qū)所以能夠同時擴(kuò)增出甲基化和非甲基化靶序列它的不足是耗費(fèi)時間和耗資過多至少要測序 10 個以上的克隆才能獲得可靠數(shù)據(jù),同時需要大量的克隆及質(zhì)粒提取測序過程較為繁瑣、昂貴

  亞硫酸氫鈉測序法的簡單實(shí)驗流程如下:

        1、引物設(shè)計與測試;

        2、基因組提取;

        3、亞硫酸氫鈉修飾DNA并純化回收修飾產(chǎn)物;

        4PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物回收并連入T載;

        5、測序分析;

        6、甲基化分析與數(shù)據(jù)統(tǒng)計。

  亞硫酸氫鈉測序法我們先簡單介紹到這里啦,下期咱們分步詳細(xì)講解BSP實(shí)驗的實(shí)驗步驟,如果您有還有關(guān)于BSP實(shí)驗的問題或有BSP檢測外包的需求歡迎隨時聯(lián)系普拉特澤~