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細(xì)胞遷移 (cell migration) 也稱為細(xì)胞爬行、細(xì)胞移動或細(xì)胞運動，是指細(xì)胞在接收到遷移信號或感受到某些物質(zhì)的梯度后而產(chǎn)生的移動。細(xì)胞遷移為細(xì)胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細(xì)胞體尾部收縮在時空上的交替過程。細(xì)胞遷移是正常細(xì)胞的基本功能之一，是機體正常生長發(fā)育的生理過程，也是活細(xì)胞普遍存在的一種運動形式。胚胎發(fā)育、血管生成、傷口愈合、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、動脈粥樣硬化、癌癥轉(zhuǎn)移等過程中都涉及細(xì)胞遷移。

目前人們對惡性腫瘤的研究是多方面的，從癌癥的產(chǎn)生到轉(zhuǎn)移，血管供給以及分裂增殖都一直是醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究的熱點。對于腫瘤細(xì)胞而言，其遷移特性已經(jīng)成為評價抗腫瘤藥物的重要特征；研究細(xì)胞遷移的方法較多，如劃痕法、Transwell、實時細(xì)胞追蹤和細(xì)胞芯片法等。

   今天主要給大家介紹一種應(yīng)用最廣泛的檢測方法：細(xì)胞劃痕實驗

一、細(xì)胞劃痕的實驗原理

   細(xì)胞劃痕實驗(Wound Healing) 是一種研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外實驗方法。這種方法的原理為當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕”，劃痕邊緣的細(xì)胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕”愈合，于細(xì)胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像，通過測量不同時間點的劃痕間距并計算差值，可對細(xì)胞的遷移能力做出判斷。
   傳統(tǒng)實驗方法：在融合的單層細(xì)胞上用槍頭比著直尺盡量垂直于背后的橫線劃痕；

二、細(xì)胞劃痕實驗步驟

   ①劃線，首先用馬克筆在六孔板的背部進行劃線，每孔劃3-5條線

   ②鋪板，調(diào)整好細(xì)胞狀態(tài)后，每孔鋪6×10⁵個細(xì)胞，鋪板的密度需要根據(jù)細(xì)胞本身的生長特性適當(dāng)調(diào)整

   ③劃痕，當(dāng)細(xì)胞鋪滿單層之后，用10μL的槍頭緊貼直尺，垂直于馬克筆標(biāo)記的橫線在孔中劃線

   ④圖像采集，在100倍顯微鏡下拍照，保證劃痕居中，同時注意背景一致。

三、細(xì)胞劃痕實驗結(jié)果分析

   1、圖片處理及劃痕寬度測量

   方法一：PS軟件劃線測劃痕寬度

   方法二：ImageJ軟件測劃痕面積

   2、愈合率計算及柱狀圖展示

   以時間為橫坐標(biāo)，愈合度為縱坐標(biāo)進行結(jié)果的呈現(xiàn)

四、細(xì)胞劃痕實驗適用范圍

   研究細(xì)胞基質(zhì)和細(xì)胞間相互作用對細(xì)胞遷移的影響

   1.可用于探究藥物、基因等外源因素對細(xì)胞遷移的影響

   2.一般適用于檢測貼壁生長腫瘤細(xì)胞的遷移轉(zhuǎn)移能力(上皮細(xì)胞、纖維樣細(xì)胞等)

       ①這些細(xì)胞本身具較強遷移能力
       ②細(xì)胞對無血清或低血清的有較強的耐受力(至少24小時)

五、細(xì)胞劃痕實驗注意事項

   1、細(xì)胞劃痕時細(xì)胞沒有長滿，或是長的太滿

   鋪板時的數(shù)量需根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)、增殖速度、大小進行調(diào)節(jié)，細(xì)胞較小或增殖速度慢，鋪板數(shù)量需多于6×10⁵個細(xì)胞/孔；細(xì)胞較大或增殖速度較快則需少于6×10⁵個細(xì)胞/孔。
   2、怎么樣減少劃痕距離的誤差
   不同孔之間劃痕最好使用同一只槍頭，劃痕時槍頭垂直，不能傾斜，可比著直尺，保持力度一致，一次性劃完。
   3、劃痕實驗過程中培養(yǎng)條件為什么是無血清或是低血清

   可以減少單純的細(xì)胞增殖對遷移的影響。

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