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  本期普拉特澤生物跟大家一起學習的是對水稻花樣本進行TUNEL染色，TUNEL染色是一種常用的細胞凋亡檢測方法。它基于凋亡過程中DNA雙鏈斷裂，利用末端脫氧核苷酸轉移酶（TdT）將標記的dUTP連接到DNA斷裂處，從而檢測凋亡細胞。而普拉特澤生物——病理檢測平臺也非常重視這一點，為廣大科研人員提供酵TUNEL染色實驗外包服務，同時也詳細說明了TUNEL染色步驟分享給大家一起共勉！

一、        實驗目的

對水稻花樣本進行TUNEL染色。

二、        實驗樣本及分組

39個水稻花石蠟樣本

  三、實驗結果

Tunel

 PI

圖1 TUNEL染色示意圖（400×）

四、實驗結論

組織中有細胞凋亡，全細胞背景為紅色熒光，凋亡部位為綠色熒光（Merge后呈黃色）

五、 實驗材料

1.主要儀器

2.主要試劑

一、        實驗原理

細胞在發生凋亡時，會激活一些DNA內切酶，這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測，可以發現180~200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時，暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光標記，產生很強的顏色反應，從而可以通過顯微鏡檢測細胞凋亡的情況。本次實驗所用到的試劑盒中凋亡樣本會被標記為綠色，與碘化丙啶標記的紅色全細胞背景重疊后呈黃色。

二、        方法步驟

1、  石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ10min-無水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸餾水洗。

2、  修復：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止液體流走），在圈內滴加蛋白酶K工作液覆蓋組織，室溫孵育15min。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

3、  破膜：切片稍甩干后在圈內滴加破膜工作液覆蓋組織，常溫下孵育10min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

4、  末端標記反應：取反應液加到圈內覆蓋組織，切片平放于濕盒內，37℃水浴鍋孵育60min，濕盒內加少量水保持濕度。

5、  終止反應：玻片放入2×SSC室溫浸泡15min終止反應。將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

6、  背景染色：將片子置于1ug/ml的碘化丙啶中，在黑暗條件下染背景。玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上避光晃動洗滌3次，每次5min。

7、  封片：切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

8、  鏡檢拍照：切片于激光共聚焦顯微鏡下觀察并采集圖像。

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