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   克隆形成實驗是測定細胞增殖能力的有效方法之一，貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞。細胞克隆形成率表示接種細胞后貼壁的細胞成活并形成克隆的數(shù)量，可以反映細胞群體依賴性和增殖能力兩個重要性狀。通過觀察單細胞集落形成情況，來計算克隆形成率，了解其增殖能力。

其技術原理：單個細胞在體外持續(xù)增殖6代以上時細胞數(shù)量已達60個左右，此細胞群體成為克隆或集落，大小在1.0-2.0 mm之間。集落形成率表示細胞的獨立生存能力，各種理化因素可能導致細胞的克隆形成能力發(fā)生改變，通過計數(shù)克隆形成率，可對單個細胞的增殖潛力做定量分析，了解細胞的增殖率和對生存環(huán)境的適應性。軟瓊脂培養(yǎng)或平板克隆是最常用的方法。

   平板克隆形成（Colony Formation）：細胞培養(yǎng)在培養(yǎng)基中，應用于貼壁的細胞。

 實驗步驟

    Step1：細胞培養(yǎng)，調(diào)整細胞狀態(tài)

    Step2：制備單細胞懸液

   Step3：按不同的細胞濃度梯度把細胞均勻接種于培養(yǎng)平板

   Step4：培養(yǎng)一段時間

   Step5：觀察克隆情況，固定染色后計算克隆形成率

  軟瓊脂克隆形成（Soft Agar Colony Formation）：利用軟瓊脂為培養(yǎng)介質(zhì)，使細胞在懸浮狀態(tài)下生長。

 實驗步驟

   克隆形成實驗需要注意的幾個點：

   1、對數(shù)生長期，細胞狀態(tài)良好的情況下，0.25%胰酶消化，離心后重懸時一定要吹打成單細胞懸液?？梢赃x擇6孔板作為克隆培養(yǎng)板，按密度梯度（如100、200、300）接種進孔板中。接種后切記晃動平板，使細胞分布均勻。

   2、培養(yǎng)2周左右（出現(xiàn)肉眼可見細胞集落時），即可固定染色。加固定液和染色液時，覆蓋住孔板底層即可。但如果長時間不處理，需增加液體量，防止液體干涸，影響拍照效果。

   3、拍照時，務必使每個孔中無陰影，如無法達到，則逐個孔進行拍照。

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