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    CCK8，全稱為Cell Counting Kit-8，是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。普拉特澤生物承接CCK8等細胞實驗相關服務上萬例，積累了操作大量經驗，為大家詳細分享cck8檢測實驗報告，同時為廣大科研工作者開展線上的理論培訓與線下實操，可承接細胞實驗外包服務。

一、實驗目的

檢測THP-1-oe-NC、THP-1-oe-SLC25A37細胞增殖能力的變化。

二、實驗樣品

1.實驗樣本

備注：包括干預細胞用的相關試劑均按實驗樣品登記，每行登記一個或一組獨立樣品。
2. 實驗參數

三、實驗結果

表1：CCK8法檢測細胞OD值

四、實驗結論

 如圖所示，與oe-NC組相比，感染oe-SLC25A37病毒組細胞增殖能力上調。

五、實驗原理

Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物（Formazan dye）。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。

六、實驗通用儀器及試劑

1.主要儀器

2.主要試劑

七、實驗步驟

3.1 細胞復蘇

(1)     將ddH₂O預溫至37℃。

(2)     戴上手套和口罩帽子，從液氮罐中取出裝有目的細胞的凍存管（內有1 mL細胞混合液），立即投入37℃ ddH2O中，輕搖凍存管使之在1分鐘內快速溶解。

(3)     完全溶解后，75%酒精擦拭凍存管外壁消毒后帶進超凈臺。

(4)     在超凈臺中，在15 mL滅菌離心管中預先加入10 mL新鮮配制的培養基，打開凍存管，將所有凍融的細胞懸液加入該離心管中，常溫1000 rpm離心3分鐘，吸除上層的培養液。

(5)     1ml培養基重懸細胞沉淀，輕輕吹打混勻后加入T25細胞培養瓶中，補足培養基至5 mL，置于37℃、5% CO2培養箱培養。

(6)     48小時后換液，細胞融合接近80%時即可傳代。

3.2 細胞培養

THP-1-oe-NC、THP-1-oe-SLC25A37細胞用含10%胎牛血清、1%雙抗的1640培養基，在37℃飽和濕度、含5% CO₂的培養箱中培養。

3.3 細胞鋪板

(1)     取對數生長期THP-1-oe-NC、THP-1-oe-SLC25A37細胞，細胞計數。

(2)     將細胞種到96孔板中，密度為20000個細胞/孔，繼續培養。

(3)     待細胞貼壁后，0、24、48、72h后進行cck8檢測。

3.4 CCK8檢測實驗步驟

(1) 各組細胞在檢測時間點時，每孔加1/10體積 CCK8，在37℃、5％CO₂培養箱中培養3小時；

(2) 選擇450 nm波長，在酶聯免疫監測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以時間為橫坐標，OD值為縱坐標繪制折線圖。

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