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        組織樣本單細胞懸液制備方法由普拉特澤生物細胞實驗平臺分享，細胞實驗平臺專為大家提供各類細胞實驗外包服務。單細胞懸液是把組織塊或貼壁培養的細胞消化吹打以后形成的懸液，使粘連的細胞都分開。本文咱們就以組織樣本為例，為大家介紹單細胞懸液的制作方法。

        一、單細胞懸液組織樣本

        1、常見的組織類型：??脾臟、肝臟、?臟、肺臟、腦組織、腫瘤組織、?腫瘤組織、?膚組織等

        2、傳統組織處理?法：機械法：?搓法、研磨法

        3、適?樣本類型：脾臟、淋巴結、胸腺

        二、各樣本處理方法操作步驟

        1、?搓法

        （1）將300?尼龍?扎在?菌的?燒杯上；

        （2）把剪碎的組織放在?上，以眼科鑷?輕輕搓組織塊，邊搓邊加?理鹽?沖洗，直到將組織搓完；

        （3）收集細胞懸液于離?管中， 1500rpm離?5 min；棄上清液，加紅細胞裂解液重懸沉淀，室溫作?5 min，加等體積的PBS中和后，1500rpm離?5 min，棄上清，?PBS洗滌?次，再?PBS重懸，細胞計數后即可使?。

        2、研磨法

        （1）先將組織剪成1-2mm??組織塊；

        （2）放?組織研磨器中，轉動研棒，研?勻漿；

        （3）加?10ml?理鹽?，沖洗研磨器；

        （4）收獲細胞懸液，并經200?尼龍?過濾，1500rpm離?5 min；

        （5）棄上清液，加紅細胞裂解液重懸沉淀，室溫作?5min，加等體積的PBS中和后，1500rpm離?5 min，棄上清，?PBS洗滌?次，再?PBS重懸，細胞計數后即可使?。

        3、酶解法：胰蛋?酶類、膠原酶、溶菌酶、彈性蛋?酶

        適?樣本類型：肝臟、腎臟、?臟、肺臟、脊髓、腦、腸道、?膚、腫瘤等；

        三、組織樣本單細胞懸液制作操作步驟

        1、先將組織剪成泥狀。

        2 、?胰蛋?酶或膠原酶消化組織塊。

        胰蛋?酶適?于消化細胞間質較少的軟組織，如胚胎、上?、肝、腎等組織。胰蛋?酌?作濃度?般為 0. 1 %—0 . 5 % 。對于纖維較多的組織或較硬的癌組織常?0 . 25 %膠原酶，膠原酌對組織中膠原蛋?類結構消化作?強，它僅對細胞間質有消化作??對上?細胞影響不?。膠原酶常?濃度為 0 . 1—0 . 3ug / ml ，??于組織量30—50 倍的胰蛋?酶液或膠原酶液在 37°C ，搖床上消化組織，消化時間的長短依組織類型?定，?般來說，胰蛋?酶油作? 20—60 min，膠原酶需1—4h左右，?般還會加?DNA核酸內切酶。

        3、消化完畢后，將細胞懸液通過200?孔徑尼龍?過濾，以除掉未充分消化的組織；

        4、已過濾的細胞懸液經1500rpm離?5 min后，棄上清液，加紅細胞裂解液重懸沉淀，室溫作?5 min，加等體積的PBS中和后，1500rpm離?5 min，棄上清，?PBS洗滌?次，再?PBS重懸，細胞計數后即可使?。

        好啦，那關于組織樣本的單細胞懸液制備方法就講完啦，如果您也在細胞實驗上有什么不懂的問題或有細胞實驗外包的需求歡迎隨時聯系~