ELISA原理、操作以及注意事項
來源/作者:普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
普拉特澤生物繼續跟大家一起學習新的實驗——ELISA實驗。在生物醫學研究領域,ELISA(酶聯免疫吸附試驗)已成為一種不可或缺的技術手段,普拉特澤生物表達檢測平臺可承接各種表達檢測外包服務,包括檢測ELISA、Western Blot、DNA甲基化等實驗外包服務。
本文將為科研小白詳細解析ELISA的原理、操作步驟以及注意事項,讓小白們輕松掌握這一實驗技能。
(一)ELISA原理簡介
ELISA,即酶聯免疫吸附試驗,是一種基于抗原-抗體特異性結合的免疫分析技術。其基本原理是利用酶標記的抗體或抗原與待測樣本中的相應抗原或抗體發生特異性結合,通過酶催化底物顯色反應來檢測待測物質的含量。
ELISA
二、ELISA操作步驟
[1]樣本處理:根據實驗要求,對樣本進行適當的稀釋或處理,以便后續操作。
[2]抗原或抗體包被:將抗原或抗體包被在固相載體(如微孔板)上,形成固相抗原或抗體。
[3]加入待測樣本:將待測樣本加入包被好的微孔中,與固相抗原或抗體發生特異性結合。
[4]加入酶標抗體:加入酶標記的抗體或抗原,與待測樣本中的抗原或抗體結合,形成酶標復合物。
[5]洗滌:去除未結合的干擾物質,以提高實驗的準確性。
[6]顯色反應:加入底物,酶催化底物發生顯色反應,形成有色產物。
[7]結果判定:通過測量有色產物的吸光度,與標準曲線對照,計算待測樣本中抗原或抗體的含量。
ELISA實驗流程
三、注意事項
Ⅰ.實驗環境:保持實驗室環境清潔,避免污染。實驗過程中要佩戴手套,避免直接接觸樣本和試劑。
Ⅱ.試劑保存:試劑應保存在干燥、陰涼、避光的環境中,避免受潮和高溫。
Ⅲ.樣本處理:樣本處理過程中要注意避免交叉污染,確保樣本的準確性和可靠性。
Ⅳ.實驗操作:實驗過程中要嚴格按照操作步驟進行,避免誤操作導致實驗結果偏差。
Ⅴ.結果解讀:實驗結果應結合標準曲線進行解讀,避免主觀臆斷導致誤判。
ELISA樣本檢測結果圖
四、總結
通過本文的詳細介紹,相信您對ELISA的原理、操作步驟以及注意事項有了更深入的了解。在實際操作過程中,要注意實驗環境的清潔、試劑的保存、樣本的處理以及實驗操作的準確性,以確保實驗結果的可靠性。希望本文能為您在生物醫學研究領域的實驗工作提供有益的幫助。
好,ELISA原理、操作以及注意事項就介紹到這里啦~
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