番紅固綠染色原理，實驗步驟以及需要注意什么？
2023-03-14 15:00:43
來源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺
番紅固綠染色實驗步驟由普拉特澤生物病理實驗平臺為大家總結分享，本文給大家分享咱們技術長期總結下來的關于番紅固綠染色的原理，實驗步驟以及需要注意什么：
一、番紅固綠染色原理
番紅固綠染色原理是一種組織學染色方法，常用于對組織切片中膠原纖維和肌纖維進行染色。該方法的原理是：組織切片首先經(jīng)過甲醛等固定劑固定，然后使用番紅（Ponceau S）染色，番紅可染色蛋白質和膠原纖維，使它們變?yōu)榉奂t色。接下來再用酸性綠染色劑染色，酸性綠主要染色肌肉纖維，使它們呈綠色。經(jīng)過兩種染色后，膠原纖維和肌肉纖維就可以清晰地區(qū)分出來，呈現(xiàn)出不同的顏色，使組織結構更加明顯。
二、實驗步驟
1 脫蠟
1) 70 ℃烤片30 min；
2) 二甲苯（I）中脫蠟10 min；
3) 二甲苯（II）中脫蠟10 min；
4) 100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；
5) 100%乙醇（II）中5 min洗去二甲苯；
2 水化
1) 95%乙醇中水化5 min；
2) 85%乙醇中水化5 min；
3) 75%乙醇中水化5 min；
4) 蒸餾水中水化待用；
3 染色
1) 番紅染色1-2 h；
2) 流水稍洗；
3) 固綠染色1min 左右；
4 脫水
1) 無水乙醇脫水5 min；
2) 無水乙醇脫水5 min；
5 透明
1) 二甲苯（I）透明5 min；
2) 二甲苯（II）再次透明5 min；
6 封片
在石蠟切片的中央滴加一滴中性樹膠，蓋上蓋玻片封固。
7鏡檢
顯微鏡下觀察拍照。
（附番紅固綠染色實驗的圖片）
三、番紅固綠染色要注意什么
番紅固綠染色是一種較為簡單的染色方法，但在進行染色過程中，還是有一些需要注意的事項：
固定時間要適當：組織切片在進行染色前需要用固定劑進行固定，固定時間過長或過短都會影響染色效果。固定時間過長會導致細胞變性、膠原纖維變硬、失去染色能力，而固定時間過短會導致細胞和組織結構失去完整性，影響染色效果。
染色劑的使用量要合適：番紅和酸性綠的使用量要根據(jù)組織切片的大小適當調整，過多或過少都會影響染色效果。通常情況下，每次使用的染色劑量要比組織切片的體積多一些，以充分覆蓋整個組織切片。
染色時間不能過長：番紅固綠染色時間一般在10-20分鐘之間，時間過長會導致顏色變深，影響觀察效果。
染色后要徹底洗滌：染色后要用大量的蒸餾水和乙醇洗滌組織切片，去除多余染色劑，否則會影響觀察效果。
染色后要及時封片：染色后的組織切片要盡快進行封片，以避免染色劑的揮發(fā)和蒸發(fā)，影響染色效果。
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