高脂飲食誘導NAFLD模型的5大核心指標及檢測方法【全面解析】
來源/作者:普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
非酒精性脂肪肝(NAFLD)是全球最常見的慢性肝病之一,而高脂飲食(HFD)誘導的動物模型是研究NAFLD發病機制和藥物干預的重要工具。
普拉特澤生物為廣大生命科學研究人員提供非酒精性脂肪肝小鼠實驗,可根據實方案的要求選擇不同的檢測方法,本文就跟大家一起詳細介紹——高脂飲食誘導NAFLD模型的5大核心指標
并提供 實驗檢測方法,幫助研究者準確評估模型建立是否成功。
1. 肝臟組織病理學指標(HE染色 & 油紅O染色)
檢測方法
⑴HE染色(蘇木精-伊紅染色):觀察肝細胞脂肪變性、炎癥浸潤和氣球樣變。
⑵油紅O染色:特異性染色肝組織中的脂滴,定量脂肪沉積程度。
⑶NAS評分(NAFLD Activity Score):根據脂肪變性(0-3分)、炎癥(0-3分)和肝細胞氣球樣變(0-2分)綜合評估NAFLD嚴重程度。
意義
脂肪變性 ≥5% 可判定為NAFLD模型成功。
NAS評分 ≥4分 提示NASH(非酒精性脂肪性肝炎)。
2. 血清生化指標(ALT、AST、TG、TC)
檢測方法
①ALT(丙氨酸氨基轉移酶) & AST(天門冬氨酸氨基轉移酶):采用ELISA或生化分析儀檢測,反映肝損傷程度
②TG(甘油三酯) & TC(總膽固醇):評估血脂代謝異常,常用酶比色法測定。
意義
⑴ALT、AST升高 提示肝細胞損傷(通常HFD喂養8-12周后顯著上升)。
⑵TG、TC水平升高 表明脂代謝紊亂,是NAFLD的重要特征。
3. 肝臟脂質含量(肝組織TG、TC測定)
①檢測方法
肝組織勻漿法:取肝組織勻漿后,用試劑盒(如Triglyceride Assay Kit)測定TG、TC含量。
②計算公式:
肝組織TG (mg/g)=測得TG濃度 (mg/mL)×勻漿體積 (mL)肝組織重量 (g)肝組織TG (mg/g)= 肝組織重量 (g)測得TG濃度 (mg/mL)×勻漿體積 (mL)
③意義
肝組織TG含量 >10 mg/g 表明顯著脂肪沉積。
與血清TG結合分析,可評估肝臟脂質代謝異常程度。
4. 炎癥因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)
⑴檢測方法
⒈ELISA法:定量檢測血清或肝組織勻漿中的炎癥因子水平。
⒉qPCR/Western Blot:檢測肝臟中炎癥相關基因(如TNF-α、IL-6)的表達。
⑵意義
TNF-α、IL-6升高 表明肝臟炎癥反應,提示NASH進展。
結合HE染色(炎癥細胞浸潤)可更全面評估炎癥程度。
5. 肝纖維化指標(膠原沉積、α-SMA、羥脯氨酸)
檢測方法
▲天狼星紅染色:觀察膠原纖維沉積(I、III型膠原)。
▲α-SMA免疫組化:檢測肝星狀細胞活化(纖維化標志物)。
▲羥脯氨酸測定:定量肝組織膠原含量(纖維化程度)。
意義
▲纖維化評分(Ishak或METAVIR系統) 用于評估NAFLD向肝纖維化進展。
▲α-SMA陽性率升高 提示肝星狀細胞激活,纖維化啟動。
6.結論
高脂飲食誘導的NAFLD模型成功與否,需綜合評估 肝臟病理、血清生化、脂質代謝、炎癥反應和纖維化 這5大核心指標。
通過 HE染色、油紅O染色、ALT/AST檢測、TG/TC測定、ELISA(炎癥因子)和天狼星紅染色 等方法,可系統分析NAFLD
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