考馬斯亮藍染色步驟全解析
2024-12-25 17:04:32
來源/作者：普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
考馬斯亮藍染色步驟全解析來啦！這可是生物科研實驗中的“必備技能”快跟著普拉特澤生物的步伐，一起探索這個神奇的染色過程吧！
1）前期準備
?電泳結束?：首先，通過SDS-PAGE電泳將蛋白質進行分離，電泳結束后，取出凝膠。
?清洗凝膠?：將凝膠放入加有超純水的平皿中潤洗，以去除殘留的電泳液。如果凝膠較厚，可以適當增加洗滌次數和延長洗滌時間，以去除凝膠中的干擾雜質。
2）染色步驟
?Step1配制染色液：考馬斯亮藍染色液通常由亮藍G-250、甲醇、醋酸和去離子水組成。具體配方為：亮藍G-250 0.1%（w/v），甲醇50%（v/v），醋酸10%（v/v），去離子水余量。
將亮藍G-250溶解在甲醇中，加入醋酸，再加入去離子水，調整到最終體積。
?Step2?加入染色液?：將配制好的染色液倒入裝有凝膠的容器中，確保染色液完全浸沒凝膠。
?Step3?進行染色?：將容器放在水平搖床上，室溫下震蕩染色。染色時間根據凝膠的厚度和所需染色深度進行調整，通常為30分鐘至2小時。在染色過程中，要注意觀察凝膠的變色情況，避免染色時間過長導致背景顏色過深。
3）脫色步驟
?1.配制去染液?：去染液通常由甲醇、醋酸和去離子水組成。具體配方為：甲醇40%（v/v），醋酸10%（v/v），去離子水余量。將甲醇和醋酸混合，再加入去離子水，調整到最終體積。
?2.倒出染色液?：染色結束后，倒出染色液或將其回收以備后用（通常可回收使用3次左右）。
?3.加入去染液?：將配制好的去染液倒入裝有凝膠的容器中，確保去染液完全浸沒凝膠。
?4.進行脫色?：將容器放在水平搖床上，室溫下震蕩脫色。脫色時間根據實驗需求進行調整，通常為2-3小時或直至背景清晰。如果需要更低背景的凝膠，可以用純水脫色1小時以上或過夜。
4）觀察與記錄
?觀察結果?：將脫色后的凝膠放在顯微鏡下觀察，可以看到清晰的蛋白質條帶。
?記錄結果?：使用相機或掃描儀將觀察結果記錄下來，以便后續分析和比較。
在操作過程中，需要注意以下幾點：
——考馬斯亮藍染色液呈酸性，有輕微腐蝕性，操作過程中一定要佩戴手套，避免染料接觸皮膚。
——考馬斯亮藍染料有毒性，不建議加熱使用。操作后需妥善處理廢棄物。
——染色前用純水清洗能大大減少SDS等干擾雜質。
——染色后請盡快拍照，純水長時間浸泡會導致蛋白和染料的流失。
怎么樣？考馬斯亮藍染色步驟全解析就到這里啦！是不是很簡單呢？下次再做實驗的時候，不妨按照這些步驟來操作一下~如果在實驗過程中遇到技術問題
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