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        考馬斯亮藍染色法介紹由普拉特澤生物分享，在蛋白質染色方法中，目前以考馬斯亮藍染色最為常用，因為它既克服了氨基黑染色靈敏度不高的限制，又比銀染簡便易操作。普拉特澤的生物病理實驗平臺長期為廣大生物醫學人員提供考馬斯亮藍染色實驗外包服務。

        1、考馬斯亮藍染色介紹

        考馬斯亮藍染色是用考馬斯亮藍進行蛋白質染色的方法。考馬斯亮藍是一種陰離子染料， 常用考馬斯亮藍G250和R250。考馬斯亮藍 G250在游離狀態下呈紅色，當它與蛋白質 通過疏水結合后變為藍色，蛋白質-色素結 合物在595 nm波長下有最大光吸收。其光 吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。

        2、考馬斯亮藍染色的歷史

        考馬斯亮藍染色最早由 Fazekas 等在 1963 年用于醋酸纖維素膜電泳，并認為同樣可用于紙電泳，瓊脂糖電泳和淀粉凝膠電泳。1965 年 Meyer 等將此方法應用于聚丙烯酰胺凝膠電泳。

        3、考馬斯亮藍染色的靈敏度

        考馬斯亮藍染色可以達到 0.2~0.5 μg（200~500 ng），最低可檢出 0.1 μg蛋白；銀染的靈

        敏度比考染高將近 100 倍，最低可以檢出 2 ng 蛋白，通過考染條帶的深淺粗細，可以大致判斷該條帶有多少蛋白。

        4、考馬斯亮藍染料的種類

        考馬斯亮藍分為 R-150、R-250、R-350、G-250 等。其中 R-350 最為靈敏，R 為紅藍色，G為綠藍色。R-250 即三苯基甲烷，每個分子含有兩個 SO3H 基團，偏酸性，與氨基黑一樣也是結合到蛋白質的堿性基團上。G-250 即二甲花青亮藍，是一種甲基取代的三苯基甲烷。

        推薦一種考染的方法

        ⑴ 電泳后的凝膠立即浸泡在固定液（500 ml 乙醇，100 ml 冰醋酸，400 ml 蒸餾水）中

        至少 30 min，如有必要可在固定液中浸泡過夜；

        ⑵ 將固定后的凝膠在熱的染色液（0.29 g 考馬斯亮藍溶解在 250 ml 脫色液中，在使用前

        邊攪拌邊加熱至 60℃）中浸泡 10 min，然后用蒸餾水將凝膠淋洗一次；

        ⑶ 多次變換脫色液（250 ml 乙醇，80 ml 冰醋酸，加蒸餾水至 1 L），直至凝膠背景脫凈

        為止，為加快脫色，可略加溫度；以上各步最好用振蕩器（搖床）震蕩染色皿。

        ⑷ 為了防止凝膠干燥后的龜裂，脫去背景色的凝膠在保存液（25 ml 87% 甘油加 225 ml 脫

        色液）中浸泡 30 min。然后將凝膠放在玻璃板上，再用保存液浸濕玻璃紙包住凝膠在室溫下晾干。

        如果您也準備考馬斯亮藍染色的考馬斯亮藍染色的方法不是唯一的，你可以參考幾種之后總結一個適合自己的方案出來，有什么不懂得歡迎隨時給普拉特澤留言~