
免疫熒光信號不真實的原因及解決辦法
2023-03-01 14:19:27
來源/作者:普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
免疫熒光是一種常用的生物學技術,但有時會出現免疫熒光信號不真實的情況,這可能是由以下原因引起的:
1.非特異性結合:抗體可能會與其他蛋白質非特異性結合,導致假陽性信號。
解決方法:使用適當的阻斷劑,如牛血清白蛋白(BSA)或魚膠蛋白(Gelatin)來防止非特異性結合。
2.自發熒光:樣本本身可能會自發發出熒光信號,導致假陽性信號。
解決方法:使用適當的熒光淬滅劑,如苯甲酰丙氨酸(PFA)或苯乙烯二酸(Sodium azide)來淬滅自發熒光。
3.過度固定:過度固定細胞或組織會導致抗體無法穿透到細胞內部或組織內部,導致假陰性信號。
解決方法:優化固定條件,盡可能使用低濃度的固定劑和短時間的固定。
4.過度滲透:過度滲透可能導致抗體無法穿透到細胞內部或組織內部,導致假陰性信號。
解決方法:優化滲透條件,盡可能使用低濃度的滲透劑和短時間的滲透。
5.抗體質量:抗體質量不佳可能會導致假陽性或假陰性信號。
解決方法:選擇質量可靠的抗體,并對抗體進行充分驗證。
6.圖像處理:圖像處理過程可能會導致信號不真實。
解決方法:使用正確的圖像處理軟件和參數,并進行充分的圖像分析和驗證。
以上是一些免疫熒光信號不真實的原因及解決方法。在進行免疫熒光實驗時,應該注意這些問題,并盡可能優化實驗條件,以確保信號的真實性。
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