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       大家好，今天帶大家來認識一個新的實驗——Northern Blot印跡雜交實驗，考慮到上期出了Western Blot之后總有小姐姐來向小編咨詢Northern Blot的各種實驗問題，居然還有朋友連概念都是模糊的，那小編當然是即刻給安排上啦！Northern Blot實驗介紹由普拉特澤生物分子檢測平臺給大家總結分享，普拉特則專業提供Northern Blot外包實驗服務，分子檢測平臺成立以來承接了Northern Blot業務幾百次，積累了極其豐富實驗操作經驗，快來學習吧！

圖片來源《Feedback inhibition of L1 and alu retrotransposition through altered double strand break repair kinetics》

       Northern印跡雜交（Northern blot）。這是一種將RNA從瓊脂糖凝膠中轉印到硝酸纖維素膜上的方法。DNA印跡技術由Southern于1975年創建，稱為Southern印跡技術，RNA印跡技術正好與DNA相對應，故被稱為Northern印跡雜交，與此原理相似的蛋白質印跡技術則被稱為Western blot。（鏈接奉上快去學習）

       Northern Blot印跡雜交的實驗原理是：整合到植物染色體上的外源基因如果能正常表達，則轉化植株細胞內有其轉錄產物——特異mRNA的生成。將提取的植物總RNA或mRNA用變性凝膠電泳分離，則不同的RNA分子將按分子質量大小依次排布在凝膠上；將他們原位轉移到固定膜上；在適宜的離子強度及溫度條件下，用探針與膜雜交；然后通過探針的標記性質檢測出雜交體。若經雜交，樣品無雜交帶出現，表明外源基因已經整合到植物細胞染色體上，但在該取材部位及生理狀態下該基因并未有效表達。

       Northernblot的優勢在于它可檢測目的片段的大小、是否具有可變剪切出現、可允許探針的部分不配對性，雜交過后的膜經過一定的處理除去探針后還可保存很長時間再次雜交使用。

       那么為什么northern見的比較少呢？

       因為實驗需要的RNA量比較大，對一些少量和痕量樣品是很難實現的，因此很多實驗都做反轉錄后的定量分析。但事實上除了無法給出realtimePCR那種量化數據外（realtimePCR，尤其是間接法的，做過的人應該有個概念吧，你標準曲線稍微偏一點點，結果就有倒過來的可能），Northern的結果才是最為直接，最可信的結果，因為cDNA的定量經過了反轉錄這一步，由于多了一步操作因而也多了一步不確定的因素，而且由于檢測的靶由RNA調到了DNA，做PCR和雜交時結果也就會受到genomicDNA的影響（reverse-Northernblot和RT都一樣），另外在雜交實驗中，DNA-RNA，RNA-RNA這兩種雜交雙鏈的穩定性是比DNA-DNA穩定和嚴格的多的，因此不管是DNA探針還是RNA探針，檢測RNA靶要比檢測DNA靶在嚴謹性上要高很多。因此Northern Blot在材料和技術上的問題沒辦法做，所以在通過反轉錄做cDNA。

       好啦，那么關于Northern Blot印跡雜交實驗我們就介紹到這里啦！還有需要補充的或者更多不了解的直接給客服留言問題和聯系方式，技術小姐姐會一個個耐心解答哦！當然有Northern Blot外包或代做的需求也可以隨時留言哦！