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RNA pull-down實驗原理介紹+實驗步驟

2023-04-13 17:37:28

來源/作者:普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺


    大家好!今天普拉特澤生物繼續帶大家一起學習新實驗——RNA pull-downll實驗,RNA pull-down實驗是一種用于尋找RNA靶標的實驗方法,它

    結合了RNA雜交技術和親和層析技術。普拉特澤生物病理實驗平臺長期為大家提供RNA pull-down實驗代做外包服務,本文跟大家分享RNApull-down實驗原理介紹+實驗步驟:


 

    該實驗的主要原理是利用一種與目標RNA互補的DNA探針固定在瓊脂糖珠上,通過混合樣品中的RNA和蛋白質來鑒定RNA的結合伴侶。





    具體步驟如下:


    1. 在實驗前制備好具有生物學意義的RNA分子,并根據需要對其進行修飾或標記。


    2. 將RNA與DNA探針情況下進行熱變性,然后快速冷卻,以便DNA可以與RNA形成完整的雙鏈結構,這個過程被稱為RNA逆轉錄合成。


    3. 將RNA-DNA卡特蘭復合物添加到瓊脂糖珠中,并通過旋轉等手段使其定時搖動以保證孵育的均勻性。


    4. 導入含RNA和蛋白質的細胞裂解液,將孵育液孵育24-72小時,使這些蛋白質與靶RNA結合。


    5. 通過洗滌去除未結合的蛋白質,還原RNA-DNA復合物,從而使靶RNA單鏈從DNA探頭上解離,這部分是拉下(pull-down)步驟。


    6. 將洗滌過程中留下的蛋白質分離、純化,并通過蛋白質分析技術進行分析。


    總之,RNA pull-down實驗是一種簡單有效的技術,可用于確定RNA結合伴侶,發現潛在的RNA功能以及了解它們與蛋白質相互作用的方式。




                                      (附RNA pulldown實驗案例圖)


    好啦,RNA pull-down實驗原理和步驟我們就簡單介紹到這里啦,同學們有沒有一個簡單的了解呢?不懂得可以給客服留言技術給您詳細解

答。下一篇再詳細為大家介紹檢測RNA pull-down實驗結果的分析,普拉特澤生物誓讓大家透徹學習RNA pull-down實驗。當然若果您有RNA pull-down實驗或其他醫學科研實驗外包的需求,歡迎隨時咨詢哦。