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        大家好~今天跟大家一起學習的是實時熒光定量PCR實驗，普拉特澤生物跟大家一起從實驗的介紹、實驗步驟、操作注意事項、常見問題這四個方面跟大家一起學習，本篇及時實時熒光定量PCR的一個簡單介紹，一起來看吧！

        實時熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一種在DNA擴增反應中，以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環后產物總量的方法。通過內參或者外參法對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。Real-timePCR是在PCR擴增過程中，通過熒光信號對PCR進程進行實時檢測。由于在PCR擴增的指數時期，模板的Ct值和Log模板的起始拷貝數存在線性關系，所以成為定量的依據。

        實時熒光定量PCR的原理是：在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。將標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后，完成高溫變性，低溫復性，適溫延伸的熱循環，并遵守聚合酶鏈反應規律，與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷，熒光素游離于反應體系中，在特定光激發下發出熒光，隨著循環次數的增加，被擴增的目的基因片段呈指數規律增長，通過實時檢測與之對應的隨擴增而變化熒光信號強度，求得Ct值，同時利用數個已知模板濃度的標準品作對照，即可得出待測標本目的基因的拷貝數。

        實時熒光定量的檢測方法主要是分為兩種：SYBRGreenⅠ法和TaqMan探針法

        1、SYBRGreenⅠ法：

        在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。

        SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖

        PCR產物熔解曲線圖（單一峰圖表明PCR擴增產物的單一性）

        2、TaqMan探針法：

        探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成完全同步。

        那么實時熒光定量PCR在實際的生活中有哪些應用呢？

        1、臨床疾病診斷

        各型肝炎、艾滋病、禽流感、結核、性病等傳染病診斷和療效評價；地中海貧血、血友病、性別發育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優生優育檢測；腫瘤標志物及瘤基因檢測實現腫瘤病診斷；遺傳基因檢測實現遺傳病診斷。

        2、動物疾病檢測

        禽流感、新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等、炭疽芽孢桿菌。

        3、食品安全

        食源微生物、食品過敏源、轉基因、乳品企業阪崎腸桿菌等檢測。

        4、科學研究

        醫學、農牧、生物相關分子生物學定量研究。

        好啦，那實時熒光定量PCR我們就簡簡單單的介紹到這里啦！下期跟大家分享實時熒光定量的PCR的操作步驟！如果您有實時熒光定量PCR實驗外包的需求的話歡迎留言，我們會及時回復的哦！