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        質(zhì)粒抽提實驗步驟由普拉特澤生物工具平臺總結(jié)分享。普拉特澤生物工具平臺保存有大量的細胞質(zhì)粒、組織切片等生物資源，同時可以為基礎(chǔ)科研人員提供質(zhì)粒抽提的實驗外包服務(wù)，本文給大家介紹質(zhì)粒抽提的詳細實驗步驟：

        一、質(zhì)粒抽提實驗準備

        1、實驗設(shè)備準備：超凈工作臺、微量移液器、電熱恒溫鼓風干燥箱、電子天平、-80℃超低溫冰箱、移液器、超微量核酸分析儀、反滲透超純水機、立式圓形壓力蒸汽滅菌鍋、離心機、凝膠成像系統(tǒng)

        2、實驗試劑準備：1.5 mL EP管、乙醇、低內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒、核酸染料、瓊脂糖、6×Loading Buffer

        二、試劑盒法抽提質(zhì)粒實驗原理

        質(zhì)粒是細胞內(nèi)的一種環(huán)狀小分子DNA，是進行DNA重組的常用載體。作為一個具有自身復(fù)制起點的復(fù)制單位獨立于細胞的主染色體外。 質(zhì)粒DNA上攜帶了部分的基因信息，通過基因表達后能使其宿主細胞表現(xiàn)相應(yīng)的性狀。在DNA重組中，質(zhì)粒或者經(jīng)過改造的質(zhì)粒載體可以通過連接外源基因構(gòu)成重組質(zhì)粒。

        三、質(zhì)粒抽提實驗步驟

        1、細菌培養(yǎng)

        取滅菌的試管，在超凈工作臺中加入10 mL LB含相應(yīng)抗性的培養(yǎng)基，然后吸取10 μL菌液（或者從平板上挑取單菌落）接種到培養(yǎng)基中，做好標記，37℃/200 rpm 于搖床中過夜培養(yǎng)。

        2、保菌

        從搖床中取出試管，在超凈工作臺中取滅菌的1.5 mLEP管做好標記，吸取400 μL菌液于EP管中，再加入200 μL30%的甘油。

        3、質(zhì)粒提取---試劑盒法

        根據(jù)購買的試劑盒詳細操作。

        4、 瓊脂糖凝膠電泳檢測

        （1）取50×TAE緩沖液10 mL加水至500 mL，配制成1×TAE稀釋緩沖液待用。

        （2）制備膠液

        （3）制備膠板：制膠時先將膠槽及底板完全清洗并擦干，膠槽置于水平支持物上，插上樣品梳子，注意觀察梳子齒下緣應(yīng)與膠槽底面保持1 mm左右的間隙。

        （4）加樣：取400 ng 質(zhì)粒(根據(jù)所測濃度計算體積)與1 μL 6×DNA Loading Buffer混勻，用微量移液器小心加入樣品槽中。每加完一個樣品要更換槍頭，以防止交叉污染，注意上樣時要小心操作，避免損壞凝膠或?qū)悠凡鄣撞磕z刺穿。

        （5）電泳：加完樣后立即接通電源。電泳30min后停止。

        （6）觀察：在波長為254 nm的紫外燈下觀察。DNA存在處可以見到桔紅色熒光條帶，凝膠電泳成像。

        好啦，那關(guān)于質(zhì)粒抽取實驗的詳細步驟咱們就講完啦，如果您還有什么其他的問題或有質(zhì)粒提取外包的需求，歡迎隨時留言哦！