裸鼠皮下成瘤實驗操作注意事項【新手友好】
2022-05-31 14:20:19
來源/作者：普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
裸鼠皮下成瘤實驗操作注意事項由普拉特澤生物為大家總結分享，普拉特澤生物動物實驗平臺專業承接裸鼠成瘤實驗外包、動物造模等動物實驗代做服務，積累專業豐富的實驗操作經驗。上期我們分享裸鼠成瘤實驗介紹和操作步驟后大家都說不夠詳細，有一些注意事項沒有寫出來，那今天咱們就為大家專門出一期裸鼠成瘤實驗操作的注意事項，快點學起來吧！
1、裸鼠成瘤細胞系的選擇與狀態
并非所有的腫瘤細胞都可以成瘤。在正式做實驗之前，建議去查查ATCC上面的測試數據。如果不得不用不能獨立成瘤或者難以成瘤的細胞系，請看第三點選NOD SCID小鼠，以及第四點的Matrigel法。
細胞的狀態是成瘤實驗的關鍵，所以細胞生長狀態一定要好，取處于對數生長期的細胞，細胞達80-90%左右密度為宜。收集細胞前一天晚上更換新鮮培養基。
2、成瘤細胞的處理
細胞消化后應盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時內完成，途中將細胞懸液放在冰上降低細胞的代謝。細胞接種量1*107/200ul/只，或者濃縮為1*107/100ul/只，根據腫瘤細胞成瘤效果調整細胞量，最高不要超過1*107。接種腫瘤實驗一般采用4--6周齡的裸鼠，裸鼠太老會加大成瘤難度，放大個體差異。
3、裸鼠成瘤接種部位
選擇的裸鼠一般在5-8周齡，體重18-20g左右，種植部位選擇血供豐富區域，如腋窩中后部、腹股溝中上部、背部、腋下、頸部均可以，當然腋下和頸部效果最好。
4、裸鼠皮下接種操作
接種前用槍將細胞懸液充分的吹散，防止細胞成團而降低細胞成活率；接種時，針頭在皮下進針深一點，約1cm深，減少注射后細胞懸液從針眼溢出；左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴；接種后一周左右可以見到皮下開始出現腫塊。
5、皮下腫瘤大小
根據腫瘤細胞的特性和接種細胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個月。腫瘤不宜生長過大，一般不要超過1000mm3。腫瘤大小測量一般為1周兩次，游標卡尺測量腫瘤最長和最短部位。V=1/2ab2 (a為長軸，b為短軸)。
6、皮下腫瘤保存
皮下瘤取下后一部分凍液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福爾馬林固定用做免疫組化、免疫熒光等。
好啦，那關于裸鼠皮下成瘤的注意事項我們就講解到這里啦，還有更多不懂的歡迎留言一起討論解決~
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