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        支原體培養(yǎng)法檢測支原體操作步驟由普拉特澤生物表達(dá)檢測平臺(tái)分享，培養(yǎng)法檢測支原體非常經(jīng)典，準(zhǔn)確率高，得到界內(nèi)認(rèn)可。普拉特澤生物承接的多例支原體檢測外包實(shí)驗(yàn)中，有部分周期不緊急的實(shí)驗(yàn)會(huì)選擇培養(yǎng)法。

        培養(yǎng)法為最為經(jīng)濟(jì)可靠的方法，但其實(shí)驗(yàn)周期較長，所以常用來進(jìn)行對懷疑細(xì)胞的最后甄別。常用于細(xì)胞及臨床治療細(xì)胞的支原體檢查。

        （一）材料與設(shè)備

        1. 精氨酸肉湯培養(yǎng)基   按說明稱量粉劑，蒸餾水配制，高壓除菌（加20％胎牛血清）。

        2. 支原體瓊脂培養(yǎng)基   按說明稱量粉劑，蒸餾水配制，高壓除菌（加20％胎牛血清）。

        3. 其他   超凈工作臺(tái)、無菌吸管、試管架、培養(yǎng)試管／皿、37°C 培養(yǎng)箱。

        （二）操作步驟

        1. 樣品的儲(chǔ)存。樣品取材后，最好盡快進(jìn)行檢測。樣品如在24h 以內(nèi)進(jìn)行支原體檢測，可儲(chǔ)存在2~8℃; 如果超過24h 樣品應(yīng)放置于－20℃ 以下保存。-20℃保存的樣品，進(jìn)行檢測時(shí)需重新加入到對照培養(yǎng)細(xì)胞中，培養(yǎng)72h 后，取上清直接進(jìn)行接種檢測。

        2. 準(zhǔn)備12支精氨酸肉湯培養(yǎng)基、支原體瓊脂培養(yǎng)基（半流體）。

        3. 將樣品分別接種到10ml 精氨酸肉湯培養(yǎng)基、半流體培養(yǎng)基中（已冷卻至36℃） ，每支培養(yǎng)基接種樣品0.5~ 1.0ml， 每種樣品接種6 支精氨酸肉湯培養(yǎng)基，3 支半流體培養(yǎng)基。

        4. 接種6d 后，取3 支精氨酸肉湯培養(yǎng)基中樣品0.5 ~ 1.0ml. 復(fù)種于精氨酸肉湯培養(yǎng)基中。

        5. 36 ℃ 培養(yǎng)29d, 每隔3d 觀察一次。記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

        （三）結(jié)果判斷

        培養(yǎng)結(jié)束時(shí)，精氨酸肉湯培養(yǎng)基分為6支接種，3支取出，3支復(fù)種。精氨酸肉湯培養(yǎng)基如有支原體生長，則液體顏色改變（粉色或黃色) 。

        半流體培養(yǎng)基中如有支原體生長，則出現(xiàn)絮狀沉淀。

        雖然用培養(yǎng)法檢測支原體準(zhǔn)確率非常高幾乎沒有失誤，但因?yàn)橛门囵B(yǎng)法檢測支原體的準(zhǔn)確度非常高幾乎沒有失誤，雖然由于耗時(shí)長而不如簡單快速的PCR檢測法，但勝在經(jīng)濟(jì)便宜，因此大家可以學(xué)下來，經(jīng)費(fèi)不足的時(shí)候使用哦~如果您還有其他的技術(shù)問題或有支原體檢測外包的需求歡迎直接留言，普拉特澤隨時(shí)在線！