ALP/堿性磷酸酶染色實驗原理與步驟
2022-01-23 11:18:44
來源/作者：普拉特澤-病理染色技術平臺
一、ALP染色實驗目的與原理
實驗目的：使用ALP染色試劑檢測組織中的堿性磷酸酶活性。
實驗原理：堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時偶聯(lián)法)，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細胞內堿性磷酸酶可使AB-BI磷酸鹽水解，釋放出磷酸不萘酚，后者不偶聯(lián)重氮鹽生成有色產物，定位于細胞質中。該染液可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色，堿性磷酸酶活性部位呈藍色，位于胞槳，結果較金屬鹽沉淀法可靠。
二、ALP染色臨床意義
臨床上堿性磷酸酶染色法對以下疾病有鑒別意義：類白血病反應顯著增高，慢性粒細胞白血病 (無繼發(fā)感染) 顯著減低;急性細菌感染伴白細胞增多時，顯著升高，病毒性感染時多正常;真紅細胞增多癥升高，繼發(fā)性紅細胞增多者則正常，而陣發(fā)性血紅蛋白尿癥則減低;再生障礙性貧血患者明顯升高，淋巴細胞白血病往往升高，但該病成熟的中性粒細胞較少，較難判斷。
三、ALP染色實驗步驟
Step1：石蠟切片脫蠟至蒸餾水。
Step2：冰凍切片在丙酮-氯仿等量混合液中4°C固定2-5分鐘。
Step3：切片入試劑A，37C孵育。冰凍切片5-15分鐘；石蠟切片2-12小時，流水沖洗2分鐘后入蒸水。
Step4：入試劑B，37C, 5分鐘。
Step5：流水沖洗5分鐘后入蒸餾水。
Step6：試劑C用蒸餾水50倍稀釋，即配即用。
Step7：切片入試劑C稀釋液2分鐘。
Step8：流水沖洗10分鐘后入蒸餾水。
Step9：冰凍切片用甘油明膠封片;石蠟切片常規(guī)脫水，透明，樹膠封片。
【例：小鼠骨組織ALP染色】
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