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一、GUS染色實驗目的與原理

GUS染色的實驗目的是對植物樣本進行染色，因為絕大多數植物細胞內不存在內源GUS活性，因此GUS基因廣泛用作轉基因植物的報告基因。

GUS（β-glucuronidase，β-D-葡萄糖苷酸酶）基因是目前常用的一種報告基因，其表達產物β-葡萄糖苷酸酶是一種水解酶，能催化許多β-葡萄糖苷酯類物質的水解，它可以將5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，縮寫為X-Gluc）分解為藍色物質。

二、GUS染色實驗方法

（1）組織化學染色定位方法

（2）熒光法測定GUS活性

（3）分光光度法測定GUS活性

三、GUS染色實驗步驟

以某植物樣本為例：

step1: 90%丙酮固定20 min;

(丙酮(acetoue)滲透力很強，能使蛋白質沉淀凝固，但不影響蛋白質的功能基團而保存蛋白質的活性，用于固定磷酸酶和氧化酶效果較好，因此可用于GUS染色前的固定，可防止GUS信號的擴散。特點是固定快、滲透力強，易使組織細胞收縮；但保持細胞結構的能力欠佳。固定方法：一般4℃下20分鐘為宜。)

Step2 : 加1 mL GUS洗液洗去丙酮，洗2遍:

Step3 : 加GUS染色液，冰上抽真空15-20 min;

Step4 : 37°C放置，隔一陣觀察一下，染上色了就進行下面步驟

Step5 : 吸出染色液，加入1 mL 70%乙醇，停止染色反應及脫色

Step6 : 更換幾次乙醇直到脫色完全

Step7 : 解剖鏡及顯微鏡拍照觀察

載玻片上加適量HCG透明液，用鑷子取出幼苗在透明液中鋪平，蓋上蓋玻片，解剖鏡觀察整株，顯微鏡觀察細節并拍照。