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 大家好！今天普拉特澤生物跟大家一起學習一個新的實驗，DNA pull-dwon實驗，實驗介紹由普拉特澤生物分子檢測平臺總結分享，分子檢測平臺專業承接DNA pull-down實驗外包，為廣大生物科研路上的研究人提供實驗上的幫助。

  DNA Pull down實驗是用脫硫生物素標記特異性DNA探針，脫硫生物素探針可以和偶聯在磁珠上的鏈霉親和素親和結合。提取物與磁珠-DNA探針孵育，作用蛋白質分子可以和DNA探針特異性結合；經過洗滌可以將非特異性結合蛋白質去除；用 Western Blot或質譜對產物進行檢測分析。

        一、實驗流程

         一般來說，該實驗首先，需要針對待研究目的基因的調控區域設計并制備特異性探針（以脫硫生物素標記為主流）；同時，制備細胞核提取物；將探針和核提取物共同孵育，DNA結合蛋白就會和靶向序列特異性結合；然后，通過親和素磁珠純化蛋白質DNA復合物；最后針對獲得的蛋白，使用Western blot驗證或者質譜方式鑒定蛋白質類型。

       二、 DNA pull-down技術應用

        DNA pull-down以感興趣的DNA序列為探針，尋找與該序列結合的蛋白質，最常見的應用是尋找某特定基因啟動子區域的轉錄因子。

        a. DNA Pull down WB，用于檢測目標DNA序列與某樣本中的待測蛋白是否存在相互作用；

        b. DNA Pull down MS，用于篩選目標DNA序列與某樣本中的哪些蛋白具有相互作用。

        三、RNA pulldown優缺點：

        ①　富集分析低豐度蛋白；

        ②　探針制備簡便，周期短；

        ③　獲得特異性蛋白與下游蛋白質檢測技術兼容；

        缺點：

        ①　長連探針往往存在非特異結合現象；

        ②　反應條件要求無核酸酶；

        ③　體外實驗，相對體內實驗存在一定弊端；

        四、RNA pulldown實驗步驟

        1.探針設計及標記

   2.樣本前處理

   3. Pull down

   4.蛋白質檢測-- Western blot

   5.蛋白質檢測-- MS

   好啦，DNA pull-down實驗就簡單介紹到這里啦，結尾給大家簡單介紹了一下實驗的框架流程，下期根據這個流程給大家詳細分享DNA pull-down實驗的詳細步驟，如果您也對DNA pull-down實驗感興趣或有DNA pull-down外包的需求，歡迎選擇咱們普拉特澤生物！下期見~