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        今天普拉特澤生物跟大家一起學習的就是——EDU法檢測細胞增殖實驗操作步驟。細胞增殖的能力是評價細胞、代謝、生理、病理狀況、細胞活性、基因毒性等的重要指標之一，上兩篇我們學習了最常用的cck8法和MTT法檢測細胞增殖，今天一起來看看EDU法如何進行細胞增殖的檢測吧

細胞增殖檢測之MTT法【附視頻教程】
cck8法檢測細胞增殖詳細操作步驟【附視頻教程】

        EdU可以說是一款革命性的細胞增殖狀態檢測方法與傳統的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比，EdU只有BrdU抗體大小的1/500，在細胞內更容易擴散，不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、器官的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。

        EDU檢測細胞增殖實驗詳細操作步驟如下：

        一、首先用EdU來標記細胞

        細胞，如果使用其它類型的細胞，實驗可能需要做調整。建議EdU起始濃度是10mM，或者根據細胞類型設置幾個梯度預實驗進行預實驗，再進行正式實驗。

        1.在六孔板里的蓋玻片上培養細胞，使其生長至所需密度后處理細胞;

        2.用10mM EdU溶液在無血清培養基中制備2xEdU工作溶液;

        3.預熱2x EdU溶液，然后將2xEdU溶液添加到等體積含有實驗細胞的培養基中，獲得1xEdU溶液。例如，對于zui終濃度為10M的溶液，可用20MEdu注意：建議不要更換所有的培養基，因為這會影響細胞增殖速率;將處理好的細胞孵育12小時;孵育完成后立即進行下一步。

        二、細胞固定和透化

        1,孵育后除去培養基，并向每個含有蓋玻片的孔中加入2.5mL含多聚甲醛的 PBS，室溫下孵育15分鐘;

        2.除去固定液，用2.5mLPBS洗滌孔中的細胞5分鐘，重復三遍;

        3.除去洗滌液，然后向前五個孔中加入2.5mL通透液，室溫下孵育20分鐘:

        4.除去通透緩沖液，用2.5mLPBS洗滌每個孔中的細胞兩次，除去洗滌液;

        5.立即進入步驟C。

        三、 EdU檢測

        每孔使用100L反應混合物。反應混合物體積可根據實際情況進行調節，但必須按比例加入反應組分。

        1.制備 Click-iT 反應混合物。注意要按表中列出的順序添加成分，否則反應將無法得到 zui佳效果。配置好的Click-iT反應混合物必須在15分鐘內使用。

        2.向每個玻片上加入100Click-iT反應混合物，室溫下避光孵育30分鐘;

        3.除去反應混合物，用2.5 mLPBS洗滌每孔一次后，除去洗滌液;

        可選擇步驟:進行核染色(DAPl或Hoechst33342)或抗體標記

        提示：在孵育過程中一定要避光。如不需要其它染色，孵育后請直接進行成像和分析

        好啦，那EDU檢測細胞增殖的操作步驟我們就介紹到這里啦，需要細胞增殖檢測實驗外包或還有更多不懂的歡迎留言，技術免費為大家答疑解惑~我們下期見！