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        cck8法檢測細胞增殖法由普拉特澤生物細胞實驗平臺為大家總結分享，文末附上細胞增殖檢測的理論與實操視頻教程供大家學習。上兩篇咱們簡單學習了一下細胞增殖的介紹與檢測細胞增殖的七種方法，一直在普及細胞增殖檢測的理論知識，今天終于開始學習細胞增殖檢測的實操步驟啦。上兩篇理論鏈接奉上：
                                              細胞增殖檢測——什么是細胞增殖？
                                             細胞增殖檢測——細胞增殖檢測方法匯總

        今天，普拉特澤給大家分享的是細胞增殖檢測種最常用的檢測方法，cck8法檢測細胞增殖。Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。話不多說來上干貨吧：

        以cck8法檢測細胞的增殖能力為例：

        一、準備cck8檢測細胞增殖實驗器材

        實驗儀器：CO2恒溫培養箱、光學倒置顯微鏡、超凈工作臺、血球計數板

        實驗試劑與耗材：DMEM/F12培養基、胎牛血清、胰酶、6cm細胞培養皿、抗生素、96孔細胞培養板、CCK-8

        二、cck8檢測操作步驟

        1、細胞復蘇

        （1）將ddH2O預溫至37℃。

        （2）戴上手套和口罩帽子，從液氮罐中取出裝有目的細胞的凍存管，立即投入37℃ ddH2O中，輕搖凍存管使之在1分鐘內快速溶解。

        （3）完全溶解后，75%酒精擦拭凍存管外壁消毒后帶進超凈臺。

        （4）在超凈臺中，在15 mL滅菌離心管中預先加入10 mL新鮮配制的培養基，打開凍存管，將所有凍融的細胞懸液加入該離心管中，常溫1000 rpm離心3分鐘，吸除上層的培養液。

        （5）1mL培養基重懸細胞沉淀，輕輕吹打混勻后加入T25細胞培養瓶中，補足培養基至5 mL，置于37℃、5% CO2培養箱培養。

        （6）48小時后換液，細胞融合接近80%時即可傳代。

        2、細胞增殖待測細胞預處理

        細胞放在專用的培養基內，在適宜待測細胞溫度濕度的培養箱中培養。

        3、 CCK-8檢測實驗

        (1) 取生長狀態良好的各組細胞用0.25%胰酶消化后，細胞計數。

        (2) 將細胞種到96孔板中，密度為7000個細胞/孔。

        (3) 各組細胞在檢測時間點時，每孔加1/10體積 CCK-8，在37℃、5％CO2培養箱中培養2小時。

        (4)選擇450 nm波長，在酶聯免疫監測儀上測定各孔光吸收值，記錄結果，以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制細胞生長曲線。

        (5) 通過Gradpad軟件計算并繪制細胞增殖曲線圖。

        好了，cck8法檢測細胞增殖的想著操作步驟就介紹到這里啦，觀看視頻課程點擊：cck8檢測細胞增殖視頻教程，沒有看懂有疑問或者還有要補充操作流程的同學歡迎隨時留言，如果您需要細胞增殖檢測實驗外包或待測的需求，歡迎選擇普拉特澤生物！