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  FISH染色實(shí)驗(yàn)步驟由普拉特澤生物為大家總結(jié)分享，普拉特澤生物長期承接各種科研實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，積累大量的實(shí)操經(jīng)驗(yàn)，本文就來給大家分享一FISH 染色的實(shí)驗(yàn)步驟

一、實(shí)驗(yàn)步驟

    1.切片脫蠟水化。

    
    2.通透
    a.【1×PBS】清洗5 min；b.加入預(yù)冷的【通透液】（含0.5%TritonX-100的PBS），4°C靜置5 min；c.棄去【通透液】后，加入【1×PBS】清洗5 min，3次。

    
    3.探針檢測
    a.加入200 uL【預(yù)雜交液】，37°C封閉30 min；（預(yù)雜交液：將適量Blocking Solution與Pre-hybridization buffer按照1：99混勻后，37℃孵育至透明澄清狀態(tài)（約30 min）后，分裝保存。在使用前，須在37℃氣浴或水浴中孵育至澄清透明。）

    b.預(yù)雜交同時(shí)，將【雜交液】在37°C中預(yù)熱；1）c.避光條件下，把2.5 uL探針加入到100μl【雜交液】中；注：探針濃度可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況進(jìn)行優(yōu)化。雜交液配制：將適量BlockingSolution與HybridizationBuffer按照1：99混勻，37℃孵育30 min后分裝保存。在使用前，須先在37℃氣浴或水浴中孵育30 min。雜交液顏色偏黃屬于正?，F(xiàn)象。

    注：Pre-hybridizationBuffer（試劑A）和HybridizationBuffer（試劑B）從低溫取出時(shí)可能有沉淀析出，屬于正常現(xiàn)象。

    d.棄去切片中的【預(yù)雜交液】，加入100uL含有探針的【探針雜交液】，避光，37°C雜交過夜。

    e.避光，42°C，【雜交洗液I】清洗3次，每次5 min，以降低背景信號(hào)；

    f.避光，42°C，【雜交洗液II】清洗1次；g.避光，42°C，【雜交洗液III】清洗1次；h.避光，【1XPBS】清洗，室溫5 min。注：所有指定溫度的步驟，注意將相關(guān)試劑預(yù)熱到對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)所需溫度后再使用。
    
    4.(如組織有自發(fā)熒光，可增加步驟蘇丹黑自發(fā)熒光淬滅劑進(jìn)行淬滅。）

    5.封片避光條件下，滴加封片劑用蓋玻片密封，進(jìn)行熒光檢測。

 
 二、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

   DAPI染出來的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍(lán)色，陽性表達(dá)為相應(yīng)熒光素標(biāo)記其他顏色熒光。陽性結(jié)果可對(duì)比陰性對(duì)照結(jié)果來進(jìn)行判別。

這期FISH染色實(shí)驗(yàn)就到這里結(jié)束啦，所以如果您有FISH染色的實(shí)驗(yàn)的需求歡迎隨時(shí)咨詢普拉特澤生物~或者可與我們技術(shù)老師直接聯(lián)系哦:18570028002（微信同號(hào)）