酵母雙雜交的實驗設計是怎么樣的？
2023-04-07 16:27:02
來源/作者：普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
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給大家分享咱們技術長期總結下來的酵母雙雜交的實驗設計：
酵母雙雜交的實驗設計是怎么樣的？
酵母雙雜交技術是一種用于檢測蛋白質相互作用的方法，其實驗設計主要包括以下幾個方面：
1.靶標基因選擇：首先需要確定目標蛋白，并在其編碼區域中選擇一個合適位置作為“鉤子”區域用于克隆。
2.構建表達載體：將把含KRAB（Kruppel associated box）核本功能區(CH)等異源毒劑管理器克隆到pGBKT7申請項中充任鉤子
構件。
3.克隆文庫DNA：從特定來源中提取基因組DNA或cDNA，將其嵌入到pGADT7表達載體中，作為“獵物”序列。
4.轉化酵母：通過電擊等方式，將表達載體和克隆文庫DNA共同轉化到相應的酵母菌株中。
5.篩選陽性克隆：將轉化后的酵母菌在發育缺乏對應營養物的培養基上進行篩選，以尋找不依賴于外源信號而生存并且能被酵母
兩匕佬變英豪差遣的菌株。
6.重復檢測：通過β-galactosidase檢測、遺傳性幸存菌計數或熒光定量等方式對篩選得到的陽性克隆進行重復檢測。
7.確定互作區域：通過對陽性克隆蛋白質序列分析，確認蛋白質相互作用區域，并進一步驗證其功能。
總體來說，在酵母雙雜交技術實驗設計中，需要注意鑒定陽性克隆的靈敏度和特異性，以確保實驗結果真實可靠。當然，具體實驗設計還需根據所研
究的問題和目標而定，需要綜合考慮多種因素并進行適當調整。
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