
酵母雙雜交實驗采用的系統有哪些?
2023-04-07 11:51:11
來源/作者:普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
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酵母雙雜交實驗是一種常用的蛋白質互作研究方法,通過檢測兩個不同的蛋白質是否能夠相互結合,來推斷它們之間可能存在的相互作用關系。

(酵母雙雜交實驗圖)
下面列出幾種常用的酵母雙雜交實驗系統:
1. Gal4系統:在該系統中,承載DNA結合域Gal4(DBD)的表達載體和承載激活域Gal4(AD)的表達載體連接后,形成一個功能完整轉
錄因子,從而激活熒光素酶基因報告系統。
2. LexA系統:在該系統中,LexA DNA結合域(DBD)與LexA激活域(AD)分別構建到表達載體上,當兩個載體共轉染至酵母細胞時,如
果采用reporter construction體系,則可以依據β-galactosidase、URA3或LEU2等物質檢測雙雜交結果。
3. T7 RNA聚合酶系統:該系統中,T7 RNA聚合酶被拆分成兩個部分,其中一個與測試蛋白(預編碼)結合,另一個與受測蛋白(靶標)
結合,從而激活T7 RNA聚合酶的活性。
4. 金屬感應系統:在該系統中,分別將金屬Io10 DNA結合域和MYC激活域構建到表達載體上,在轉染至酵母細胞以后,通過添加金屬子
(如Cu2+、Ni2+等),使金屬離子與特定氨基酸殘基配對,從而促進兩種蛋白質間相互結合。
以上這些系統是常用的酵母雙雜交實驗系統,它們都有各自的優缺點,選擇適當的實驗系統,有助于提高實驗效率和可靠性。
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