酵母雜交實驗的常見問題—試劑篇【酵母雜交實驗外包】
來源/作者:普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
酵母雜交常見問題試劑篇由普拉特澤生物技術為大家總結分享,酵母雜交是可以體外研究蛋白與DNA、蛋白與蛋白相互作用的技術方法,也是普拉特澤生物分子檢測平臺的常規實驗之一,技術在承接的上百例酵母雜交實驗外包服務中積累了大量的經驗,今天就把我們在實驗過程中遇到的和大家經常提到的技術問題都分享給大家,快點做筆記吧!
問題一:經典轉化試劑盒和Super轉化試劑盒是否需要準備其它試劑?
答:需要準備DMSO,無菌水或者無菌生理鹽水,無需其它試劑。
問題二:50% PEG3350溶液是否可以高壓滅菌?
答:經過Coolaber檢測,PEG3350高壓滅菌可以用于酵母轉化,但過濾除菌的PEG有更高的轉化效率。高壓滅菌可能會導致PEG分子量或濃度發生變化,從而影響轉化效率。建議選擇過濾除菌PEG溶液。
問題三:50% PEG溶液過濾除菌太慢是否正常?
答:50% PEG粘稠,針頭濾器過濾太慢,可選用大面積的真空抽濾設備除菌。
問題四:Carrier DNA是否需要預變性處理以及處理方法?
答:Coolaber的Carrier DNA已經做過變性處理。基于保證轉化效率的目的,產品使用前可以再次變性處理。建議分裝至PCR管內,于PCR儀(設置98℃ 10 min,4℃ 2 min)處理后冷凍保存。變性Carrier DNA可以反復凍融三次,超過三次需要再次變性處理。
問題五:Carrier DNA是否可以由鮭魚精DNA制備以及制備方法?
答:可以。但是制備方法復雜,需要溶解,剪切并測定分子量大小,制備方法參照分子克隆。
問題六:YPD Plus Liquid Medium的作用是什么?
答:YPD Plus Liquid Medium用于酵母轉化后的復蘇培養,經Coolaber檢測,在增加復蘇培養步驟后,轉化子的數量可以增加50%-100%,在文庫轉化中作用明顯。但在互作驗證或單個質粒轉化實驗中,經典轉化Kit或Super轉化Kit的轉化效率完全可以滿足實驗要求。YPD plus營養豐富,極易污染,產品包裝為4×25 mL形式,長期不用請置于-20℃保存。
問題七:酵母轉化PEG/LiAC混合液的成分和用途?
答:酵母轉化PEG/LiAC混合液(CAT:YT0006)由50% PEG、1M LiAC、10×TE按照8:1:1組成。按照每100 μL感受態細胞加入500 μL混合液進行轉化反應,具體方法可以參照Coolaber釀酒酵母感受態細胞的使用說明。
問題八:1×TE/LiAC混合液(即用型)的成分和用途?
答:1×TE/LiAC混合液(即用型,CAT:YT0009)與通常說的1.1×TE/LiAc濃度一致,成分為110 mM LiAC及1.1×TE。主要用于制備酵母感受態細胞,具體可以參照SK2400或SK2401的使用說明。
問題九:菌落轉化Kit(SK2390)在什么情況下可以使用?
答:菌落轉化Kit可以滿足大多數單個或者兩個載體轉化的實驗,在菌落數滿足要求的條件下,每μg質粒轉化后會得到50個以上的轉化子。
好啦,關于酵母雙雜實驗常見問題試劑篇我們就解釋道這里啦,如果您還有其他的問題可以看看上篇的《酵母雜交實驗——轉化篇》,有酵母雜交實驗外包需求的老師歡迎直接留言,普拉特澤技術會第一時間回復到您!
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