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        大家好！今天普拉特澤跟大家一起學習一個新的實驗——RNA pulldown，RNA pull-down是檢測與RNA（如 miRNA、lncRNA）相互作用的未知蛋白的重要技術之一。普拉特澤生物分子檢測平臺為廣大科研人員提供RNA pull-down代做服務，給您最專業真實的科研協助，本文來跟大家一起詳細看看，什么是RNA pull-down實驗~

        RNA pull down是用于檢測RNA結合蛋白與其靶RNA之間互作的實驗手段。RNA pull down使用體外轉錄法標記生物素RNA探針，然后與胞漿蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白質復合物。該復合物可與鏈親和素標記的磁珠結合，從而與孵育液中的其他成分分離。復合物洗脫后，通過Western Blot實驗檢測特定的RNA結合蛋白是否與RNA相互作用。也可以通過質譜檢測實驗進行未知的互作蛋白鑒定。

        蛋白質與RNA的相互作用是許多細胞功能的核心，如蛋白質合成、mRNA組裝、病毒復制、細胞發育調控等，了解它們之間相互作用的分子機制對理解這些生物學過程非常重要。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用；其中活化生物素可以在蛋白質交聯劑的介導下，與已知的幾乎所有生物大分子偶聯。因此用生物素標記核酸后，利用生物素和鏈霉親和素之間的親和作用，可以純化出各種生物大分子復合物。

        那么RNA pull-down主要是有什么應用呢？

        癌癥腫瘤相關調控機制研究LncRNA發揮功能的方式很廣，可以與蛋白、DNA和RNA相互作用，參與多種生物學過程的調控。主要包括基因組表觀遺傳修飾、調控轉錄后翻譯、發揮ceRNA、增強子RNA作用等，從而對細胞的增殖、分化、遷移、凋亡、免疫等發揮調控作用。 lncRNA能夠通過對腫瘤細胞糖代謝、谷氨酰胺代謝和脂類代謝途徑中的關鍵環節進行調節，導致腫瘤細胞對葡萄糖攝取增加、谷氨酰胺分解增強及脂質生成增加，從而促進腫瘤的發生和發展。

        目前，大多數lncRNA在腫瘤細胞能量代謝中的功能和調控機制尚不完全清楚，進一步認識和了解腫瘤細胞中與lncRNA相關的能量代謝異常表現出的惡性生物學行為，將有助于為腫瘤的診斷和治療提供有效的證據及新的思路和途徑。

        環狀RNA（circular RNA，circRNA）是近來研究很熱門的一種特殊的長鏈非編碼RNA。研究發現，circRNA 在人體細胞中廣泛表達，在轉錄后水平具有調控基因表達的重要功能，并且參與多種腫瘤和其他疾病的病理發展過程。 circRNA大多由外顯子序列組成，呈閉合環狀結構，性質穩定，高度保守性，通過微小RNA“海綿”作用調控靶基因表達，與腫瘤的發生、發展相關。這些特性使circRNA有潛力成為腫瘤新型分子診斷標志物。通過競爭性與腫瘤相關微小RNA的結合，可以開發針對circRNA分子靶點的靶向治療藥。因此,circRNA在腫瘤轉化醫學研究中意義巨大。

        多種人類疾病研究 RBPs在轉錄后水平參與調控mRNA穩定性、LncRNA活性、應激、腫瘤發生發展、細胞凋亡等眾多生物學過程，且與諸多人類疾病密切相關。因此，對RBPs-RNAs相互作用網絡的研究和鑒定有重要意義。但由于RBPs作用方式復雜、功能多樣性、作用空間位置多樣化等原因，對其開展精確研究一直是一個重大挑戰。RNA領域，尤其是非編碼RNA研究的快速發展，催生了多種RBPs-RNAs相互作用鑒定技術。

        RNA pull-down的介紹和應用我們就簡單介紹到這里啦，如果您正在準備設計RNA pull-down實驗方案或對RNA pull-down實驗感興趣，歡迎隨時留言跟負責RNA pulldown實驗的技術一起討論哦！