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        巨噬細胞培養實驗步驟與注意事項由普拉特澤生物為大家分享。巨噬細胞也稱組織細胞，是由血液中的單核細胞穿出血管后分化而成的。單核細胞進入結締組織后，體積增大，內質網和線粒體增生，溶酶體增多，吞噬功能增強。巨噬細胞的壽命因所在組織器官而異，一般可存活數月或更長。普拉特澤生物承接細胞培養實驗多例，也為基礎科研人員提供巨噬細胞實驗外包服務。那關于實驗巨噬細胞培養步驟，咱們來一個個看：

        一、巨噬細胞培養設施設備與器皿

        1、巨噬細胞培養設施設備

        （1）超凈工作臺：也稱凈化工作臺，分為側流式、直流式和外流式三大類。

        （2）無菌操作間：一般由衣間，緩沖間和操作間三部分組成；操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養箱、離心機、倒置顯微鏡等，緩沖間可放置電冰箱、冷藏器及消毒好的無菌物品等。

        （3）操作間：普通培養箱、離心機、水浴鍋、定時鐘、普通天平及日常分析處理物。

        （4）洗刷消毒間：烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。

        （5）分析間：顯微鏡、計算機及打印等。

        2、巨噬細胞培養器皿

        液體儲存瓶、培養瓶、培養皿、吸管、離心管、三角燒瓶、燒杯、量筒、漏斗、注射器等

        二、巨噬細胞培養實驗步驟

        巨噬細胞也建有無限細胞系，大多來自小鼠，如P338D1、S774A.1、RAW264.7等，均獲惡性，培養中呈巨噬細胞形態和吞噬功能，易于傳代和瓶壁分離，但難以建株。培養巨噬細胞可用各樣方法和各種來源來獲取細胞，以小鼠腹腔取材法最為實用，其法如下：

        1、實驗前三天，向每只小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1mL（勿注入腸內）。

        2、引頸殺死動物，手提鼠尾將全鼠浸入70%酒精中3～5秒。

        3、置動物于解剖臺上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁。

        4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10mLEagle液注入腹腔中，同時從兩側用手指揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內充分流動。

        5、用針頭輕輕挑起腹壁，使動物體微傾向一側，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內。

        6、小心拔出針頭，把液體注入離心管中，250g4℃離心10分鐘，去上清，加10mLEagle培養基。

        7、計數細胞，每只小鼠可產生20～30×105細胞，其中90%為巨噬細胞。

        8、為獲取3×105粘附細胞/平方厘米，需接種2.5×106/mL。

        9、為純化培養細胞，去除其它白細胞，接種數小時后，去除培養液，用Eagle液沖洗1～2次后，再加新Eagle培養液置37℃，5%CO2溫箱中培養。

        三、巨噬細胞培養環境注意事項

        1、保證無菌環境

        細胞培養是無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔，空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于一室，而洗刷消毒在另一室。

        2、培養皿溫度

        維持培養細胞旺盛生長，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細胞對培養溫度要求也不同。人體細胞培養的標準溫度為36.5℃±0.5℃，偏離一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡

        3、氣體環境

        開放培養時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環境中。二氧化碳既是細胞代謝產物，也是細胞生長繁殖所需成分，它在細胞培養中的主要作用在于維持培養基的pH值。

        好啦，那關于巨噬細胞培養的實驗步驟與就講完啦，如果您還有其他的問題或有巨噬細胞實驗外包的需求歡迎隨時聯系，普拉特澤生物隨時在線。