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實驗介紹
【技術原理】
流式利用不同熒光物質標記的單克隆抗體,與待測成分作用,然后上流式細胞儀檢測待測細胞。待測細胞隨流動室內的流動鞘液排列成單列,一個個迅速通過激光聚焦區,激光在對每個細胞進行照射時可同時得到前向角散射和側向角散射2種散射光以及激發熒光標記物發出的信號,利用這些信號,可計算出相對含量,從而得到細胞群的相對比值。
根據活化狀態、發揮功能以及分泌因子的不同,巨噬細胞主要可以分為經典活化的M1型巨噬細胞和選擇性活化的M2巨噬細胞。
M1型巨噬細胞一般是通過干擾素-γ及細菌脂多糖(LPS)活化,M1主要分泌促炎因子,在炎癥早期承擔著重要作用。
M2型巨噬細胞通過Th2細胞因子如IL-4、IL-13及免疫復合物進行活化,M2表達抑制炎癥因子,起著抑制炎癥反應及組織修復的作用。M2巨噬細胞又可以分為三種亞型,分別為M2a、M2b、M2。
我們常用的檢測指標:
巨噬細胞(人):CD45 、CD14、CD86、 CD206
巨噬細胞(鼠): CD45 、F4/80 、CD11b 、CD206
【實驗流程】
組織:制成單細胞懸液-溶血-離心去上清-調整細胞密度-加入相應的標記抗體-孵育-離心去上清-上機
血液:溶血-離心去上清-調整細胞密度-加入相應的表面標記抗體-孵育-離心去上清-上機
案例展示
送檢與交付標準
樣品類型 | 樣品需求 | 運輸條件 |
---|---|---|
組織 | 離體后組織制成單細胞懸液,加入PBS培養基內 | 常溫運輸 |
活細胞 | 樣本量:1*106個細胞/TEST,加入PBS培養基內 | 常溫運輸 |
血液 | 將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內 | 常溫運輸 |