
免疫共沉淀—實驗操作流程和步驟
2023-04-12 15:45:52
來源/作者:普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
這次普拉特澤生物繼續為廣大生命科學研究人員提供免疫共沉淀實驗外包服務,可根據實方案的要求選擇不同的檢測方法,讓我們一起學習免疫共沉淀的實驗操作流程和步驟吧:

下面是免疫共沉淀實驗的實驗步驟和操作流程:
1. 樣品處理:將細胞或組織樣品進行裂解,得到待檢測的蛋白質混合物,并加入蛋白酶抑制劑以避免目標蛋白被降解。樣品來源可以是生物內提取、組織培養等。
2. 共價固定抗體:將專一的抗體連接到親和樹脂上(如蛋白A的親和樹脂或蛋白G的親和樹脂)或將蛋白與其特異性抗體結合,新形成的復合物與封閉劑緩慢搖擺在二氧化硅珠上,將COOH基與Si-OH鈍化,使碘酸鈣交聯后節制反應。
3. 免疫共沉淀:將有抗體樹脂的樣品與吸附抗體樹脂形成免疫復合物,INCUBATE用于免疫沉淀。硫酸銨沉淀可用于純化蛋白。
4. 洗滌:采用洗滌緩沖液對樣品進行洗滌,以去除非特異性的蛋白質和雜質,同時盡量避免對復合物的影響。洗滌緩沖液選擇對樣品不會引起較大影響的緩沖液和洗滌劑。
5. 后續實驗:將沉淀的復合物通過SDS-PAGE分離出來,并進行Western blotting檢測目標蛋白及其配偶蛋白。另一方面,也可以直接使用質譜分析檢測。
總之,免疫共沉淀實驗是一種通過抗原-抗體相互作用來捕獲特定蛋白質交互作用信息的高通量低污染方法。在進行實驗時,在樣品處理、試劑準備等關鍵步驟上需注意實驗設計并設置對照實驗,以確保得到可靠的結果。
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