免疫熒光染色操作步驟以及目的——細胞篇
2023-12-12 14:53:14
來源/作者：普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
免疫熒光染色步驟由普拉特澤生物病理實驗平臺為大家總結分享。普拉特澤生物為廣大科研人員提供長期穩定的免疫熒光染色外包實驗服務，本文給大家分享咱們技術長期總結下來的免疫熒光染色步驟以及目的——細胞篇
一、實驗目的
通過細胞免疫熒光技術，檢測p53蛋白在MCF-7、MDA-MB-231細胞中的表達。
二、實驗樣品及分組
細胞：MCF-7、MDA-MB-231
指標：P53（proteintech10442-1-AP）
三、實驗結果
MDA-MB-231
圖1 IF染色圖200
四、實驗結論
IF染色結果顯示：
p53蛋白在MCF-7、MDA-MB-231有表達，陽性染色為相應熒光素標記的綠色，胞核為DAPI標記的藍色。
五、實驗材料
1、主要儀器
2、主要試劑
六、實驗原理
免疫熒光細胞是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標本，熒光素受激發光的照射而發出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看見熒光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質、定位，以及利用定量技術測定含量。
七、實驗步驟
(1)在培養板中將已爬好細胞的玻片用生理鹽水浸洗3次；
(2)用4%的多聚甲醛固定爬片15 min， 生理鹽水浸洗玻片3次；
(3)0.5%Triton X-100( PBS配制 )室溫通透15min（細胞膜上表達的抗原省略此步驟）；
(4)生理鹽水浸洗玻片3次，吸干生理鹽水；
(5)每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗，4℃孵育過夜；
(6)加熒光二抗：生理鹽水浸洗爬片3次，每次3 min，吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中37℃孵育1h，生理鹽水浸洗3次；注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量避光操作；
(7)復染核：滴加DAPI避光孵育5 min，對標本進行染核，生理鹽水4次洗去多余的DAPI；
(8)在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。
好啦，免疫熒光染色步驟我們就簡單介紹到這里啦，同學們有沒有一個簡單的了解呢？不懂得可以給客服留言技術給您詳細解答。下一篇再詳細為大家介下一篇我們詳細講解免疫熒光組織篇，普拉特澤生物誓讓大家透徹免疫熒光染色實驗的檢測過程。當然若果您有免疫熒光實驗方法或其他醫學科研實驗外包的需求，歡迎隨時咨詢：18570028002（微信同號）哦
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