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  免疫熒光檢測實驗由普拉特澤生物為大家總結分享，普拉特澤生物病理實驗平臺專業承接HE染色實驗外包、原位雜交等病理實驗代做服務，積累專業豐富的實驗操作經驗。上期我們分享《免疫熒光染色操作步驟以及目的——細胞篇》后大家都說還想繼續了解，那今天咱們就為大家專門出一期關于組織篇免疫熒光染色操作步驟以及目的，快點學起來吧！

一、實驗目的

通過細胞免疫熒光技術，檢測TRPV4、BK蛋白在組織中的表達情況。

二、實驗樣品及分組

樣本：大鼠附睪組織

指標：TRPV4、BK

三、實驗結果

圖1  IF染色圖200×

四、實驗結論

IF染色結果顯示：

TRPV4、BK蛋白在組織中有特異性表達，陽性染色為相應熒光素標記的綠色和紅色，胞核為DAPI標記的藍色。

五、實驗材料

1、主要儀器

2、主要試劑

五、實驗原理

免疫熒光細胞是根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原（或抗體）。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標本，熒光素受激發光的照射而發出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看見熒光所在的細胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質、定位，以及利用定量技術測定含量。

七、實驗步驟

1.60℃烤片30 min；

2.切片脫蠟至水：先將切片置于二甲苯中10 min，2次。然后依次在100%，95%，85%和75%乙醇，每級放置5-10 min。再用蒸餾水浸洗5 min；

3.熱修復抗原：將切片浸入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）,微波爐高火加熱8min后拿出，冷卻至室溫。冷卻后PBS（pH7.2~7.6）洗滌3 min x 3次；

4.加入3% H2O2，室溫10分鐘以滅活內源性酶。PBS沖洗3 min x 3次；

5.血清封閉：切片滴加血清放入濕盒中，室溫20 min。甩干不洗；

6.孵育一抗：滴加適當稀釋的一抗，對照組滴加等量PBS，4℃冰箱過夜；；

7.加熒光二抗：PBS浸洗3次，每次3 min，吸干切片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗，濕盒中37℃孵育1h，PBS浸洗3次；注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量避光操作；

8.復染核：滴加DAPI避光孵育5 min，對標本進行染核，PBS 4次洗去多余的DAPI；；

9.封片：防熒光淬滅封片劑封片、熒光顯微鏡觀察。

今天關于免疫熒光染色操作步驟以及目的已經全部介紹完了~如果您在實驗過程中遇到技術問題，或者需要實驗外包和代做，可與我們技術老師聯系18570028002（微信同號）