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什么是shRNA載體構建?

2023-09-11 15:09:16

來源/作者:普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺

大家好!上一期咱們學完了穩定表達細胞的構建,今天普拉特澤生物繼續跟大家一起學習新的實驗——shRNA載體構建。shRNA載體構建是一種用于基因治療和RNA干擾的研究技術。它通過利用短片段的RNA(稱為shRNA或短發夾RNA)來沉默或降低特定基因的表達。為了實現這一目標,shRNA載體構建涉及將shRNA序列插入到真核表達載體中。

shRNA由兩部分組成:一部分是靶向序列,它與目標基因的mRNA序列互補配對;另一部分是莖環結構,它使shRNA能夠在細胞內降解。構建shRNA載體時,需要選擇合適的啟動子和終止子以確保shRNA在細胞內的表達。


在構建shRNA載體時,通常使用兩種不同的酶:限制性內切酶和T4連接酶。限制性內切酶用于在載體上打開一個切口,而T4連接酶則用于將shRNA序列插入到載體中。載體可以在細胞內轉錄為mRNA,并通過RNA干擾機制產生沉默目標基因的效果。

總之,shRNA載體構建是一種用于創建針對特定基因的沉默RNA的方法。通過將shRNA序列插入到真核表達載體中,可以確保shRNA在細胞內的高效表達和功能,從而實現基因的有效沉默或降低其表達水平。


shRNA載體構建的基本原理


shRNA載體構建是基于RNA干擾(RNAi)技術發展而來的。RNAi是一種由雙鏈RNA誘導的轉錄后基因沉默機制。在shRNA載體構建過程中,首先需要設計一段帶有短發夾臂(shRNA)的載體DNA,然后將該DNA插入到載體中。載體通常是一種病毒或質粒,可以將其導入目標細胞中。在細胞內,載體DNA會轉錄產生雙鏈RNA,該RNA隨后被切割成短發夾臂(shRNA)。shRNA然后與細胞內的RNAi途徑結合,產生沉默特定基因的效果。


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