southern blot實驗流程
2023-04-18 15:59:52
來源/作者：普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
普拉特澤生物為廣大生命科學研究人員提供 Southern blot實驗流程，可根據實方案的要求選擇不同的檢測方法，本文就跟大家一起學習 southern blot實驗流程：
Southern blot實驗流程如下：
1. DNA樣品制備：從組織或細胞中提取總DNA，并用約束酶進行消化。將消化的DNA樣品用瓊脂糖凝膠電泳進行切割和分離。
2. 轉移DNA片段到固體載體：利用蓋伯色圖設備，將瓊脂糖凝膠浸泡在堿性緩沖液中，隨后通過間隙吸附作用使DNA片段與硝酸纖維素或尼龍膜支持膜發生相互作用轉移到支持膜上，形成單層支持膜。
3. DNA固定：將支持膜暴露在紫外線下或使用熱交聯法將DNA固定在支持膜表面，以防止DNA折疊甚至剪斷。
4. 核酸探針制備：根據關注的特定DNA序列設計核酸探針，標記探針通常使用放射性同位素或非放射性分子進行。
5. 雜交：將標記好的核酸探針加入到支持膜上，與被檢測的DNA特定序列雜交，在相結合的區域形成穩定復合物，非特異性結合則可通過洗滌去除。
6. 洗滌和顯像：對已經雜交完畢的支持膜進行高溫，嚴格高鹽甚至堿性條件下的洗滌，以使非特異性DNA探針與樣品DNA分離并去除。隨后將X光片或顯影膜暴露在核酸探針的標記物下，進行檢測、計數和繪制。
（附Southern blot實驗操作流程）
Southern blot實驗是一種復雜的實驗技術，需要精確的思路規劃、標準化試劑及表征方式和專業實驗操作人員，以獲得準確和可靠的結果
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