Southern Blot印跡雜交實驗介紹——新人必看
來源/作者:普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
大家好,今天給大家介紹一個新的實驗,Southern Blot印跡雜交實驗。 Southern Blot是研究DNA圖譜的基本技術,在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產物分析等方面有重要價值。普拉特澤生物分子檢測平臺在southern Blot實驗上總結了非常豐富的經驗,為廣大科研人員提供包括印跡雜交等分子檢測實驗的外包與技術協助服務,掃平您的科研路。
Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是:具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下,可按堿基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段,將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上,經干烤或者紫外線照射固定,再與相對應結構的標記探針進行雜交,用放射自顯影或酶反應顯色,從而檢測特定DNA分子的含量。
Southern印跡雜交技術包括兩個主要過程:一是將待測定核酸分子通過一定的方法轉移并結合到一定的固相支持物(硝酸纖維素膜或尼龍膜)上,即印跡(blotting);二是固定于膜上的核酸與同位素標記的探針在 一定的溫度和離子強度下退火,即分子雜交過程。
印跡方法如電轉法、真空轉移法;濾膜發展了尼龍膜、化學活化膜(如APT、ABM纖維素膜)等。
Southern Blot實驗主要應用在以下方面:
1、遺傳病診斷
2、DNA圖譜分析
3、檢測樣品中的DNA及其含量
4、PCR產物分析
Southern Blot實驗大概步驟:
1、待測核酸樣品的制備
2、 瓊脂糖凝膠電泳分離待測DNA樣品
3、電泳凝膠預處理
4、轉膜
5、探針標記
6、預雜交(prehybridizafion)
7、Southern雜交
8、洗膜
9、放射性自顯影檢測
好啦,那關于Southern Blot實驗我們就介紹到這里啦,還有關于Southern Blot印跡實驗更多問題咨詢的歡迎留言哦,技術小姐姐會第一時間給到最專業的回復噠!還有需要Southern Blot實驗代做服務請認準咱們普拉特澤哦!