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   大家好呀，今天給大家分享的是Southern Blot印跡雜交實驗操作過程中的一些常見問題與注意事項，快點學起來吧。普拉特澤生物分子檢測平臺轉為科研人提供Southern Blot實驗代做與技術咨詢服務，用最專業的科研硬實力做您科研科路上的摯友

   關于Southern Blot實驗操作別人常問的問題主要是兩個：

   1、針對不同的實驗材料，Southern雜交實驗難度有差異么？答：不同的實驗材料，在進行試驗過程中難度差異很大，例如玉米、小麥、葡萄的Southern雜交檢測難度要比普通的材料要大。

   (1)、物種本身的基因組較大（例如小麥），檢測操作難度大

   (2)、材料本身含有高糖多酚（例如葡萄）嚴重影響酶切操作

   (3)、物種品系復雜（例如玉米），在基因組信息研究層面還不透徹。

   2、核酸質量對Southern雜交實驗的影響

   答：核酸質量對實驗的影響是直接的，既要求客戶提供的總量足夠——實驗消耗（上樣量），又要求保證質量——按要求準備材料。上樣量指的是基因組DNA酶切消化后，回收后的DNA片段的量。根據不同物種的基因組大小不同，上樣量也有所區別?；蚪M越大，上樣量越多。例如，擬南芥大概需要3ug ，酵母3ug，人8ug，小麥15ug。酶切消化之后不能直接上樣，需要回收純化。回收會有損失，最多能損失一半，所以需要客戶提供足夠量的樣品，一般要求至少20 ug的基因組DNA。（以上上樣量均為一個泳道）DNA 樣品一般對 OD 值和濃度有如下要求：OD260/280=1.8～2.0，OD260/230＞2.0，濃度≥100 ng/ul 。同時，需要對 DNA 樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，電泳結果顯示該 DNA 樣品無蛋白質和 RNA 等物質污染，無降解彌散，條帶清晰。

   那么實驗的操作過程中我們要注意的是Northern雜交和Southern雜交之間最大的區別在于一開始的凝膠分離步驟。因為單鏈RNA容易形成二級結構，因此RNA樣品在電泳時必須在變性條件下才能獲得好的分離效果。總RNA和poly(A+) RNA都能用于Northern Blot,不過總RNA效果會差點因為非特異性雜交會使背景變深。Northern Blot能夠檢測到約5 pg RNA量，而通常mRNA量只占總RNA的0.5%。因此要得到大于5 pg mRNA，起始總RNA量要大于100ng。

   那么關于southern blot實驗操作中的注意事項和常見問題咱們就講完啦，還有不懂的歡迎電話留言咨詢，需要southern blot實驗外包的服務普拉特澤也是當仁不讓的哦！

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