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        今天普拉特澤生物跟大家一起學習的是細胞冷凍與復蘇操作的注意事項。在低于-700C 的超低溫條件下，有機體細胞內部的生化反應極其緩慢，甚至終止，可以達到保存細胞的目的；而復時一般也在1-2 分鐘內即恢復到常溫，從而無冰晶損傷和溶質損傷產生，凍存的細胞經復蘇后仍保持其正常的結構和功能。普拉特澤生物——細胞實驗平臺專業承接各類細胞實驗代做，更保存有生物資源十余萬種，提供細胞質粒購買服務，現在我們就來看看細胞的冷凍與復蘇的操作注意事項吧！

        一、細胞凍存注意事項

        1、 DMSO配制的時候會放熱，一定要等凍存液冷卻后使用，避免灼傷細胞；

        2、 細胞離心后盡量吸干凈上清液，減少培養基殘留，避免稀釋凍存液；

        3、 不建議手動梯度降溫，溫度不穩定，容易降低存活率；

        4、 注意程序降溫盒內異丙醇的量必須高于最低刻度線；凍存5次后異丙醇需要更換一次，以免影響凍存效果；程序降溫盒需恢復到室溫以后才能繼續使用，不能從冰箱拿出來直接使用；

        5、 細胞懸液加入凍存液以后盡量短時間的在常溫放置，DMSO常溫下對細胞損傷大，分裝完成后立即轉入程序降溫盒放到-80度冰箱，不需要放4度；

        6、 -80度凍存過夜后可以轉入液氮長期保存，轉入液氮的過程需要對凍存盒進行保冷，不要長時間在常溫暴露，避免凍存管融化；

        7、 若沒有液氮罐，存放在-80度的時候一定要放靠里面的位置，避免開關冰箱導致溫度不穩定。

        8、 細胞凍存后應取出一管復蘇，檢測細胞的存活率。理論上細胞可在液氮內長期保存，為穩妥起見可在細胞凍存半年后復蘇培養，觀察細胞生長情況，再繼續凍存；

        9、 由于沒有使用凍存盒，在轉入液氮的過程中一定要對凍存管做好保冷措施，不能直接用手拿，可以用干冰或者少量液氮保護后轉移，操作過程注意安全；

        10、 轉移過程要快，避免凍存管暴露于常溫后融化；

        11、 若沒有液氮罐，存放在-80度冰箱的時候一定要放靠里面的位置，避免開關冰箱導致溫度不穩定；

        二、細胞復蘇注意事項

        1、 水浴鍋的位置如果與液氮罐不是一個房間，需要對凍存管進行保冷后轉移到水浴鍋旁，避免路途細胞表面融化；

        2、 細胞溶解過程快速搖晃以加速溶解；

        3、 已溶解的凍存細胞盡量短時間的在常溫存放，盡快離心去除DMSO；

        4、 貼壁細胞復蘇24小時后觀察，若密度達到80%，則正常傳代；若密度不到80%則繼續培養到48小時再換液；

        5、 懸浮細胞復蘇3天內不建議離心換液；

        6、 對DMSO不敏感的細胞在復蘇時也可不離心，減少操作步驟，也可降低污染的幾率。將解凍的細胞懸液直接轉移至T25細胞瓶內，補加新鮮培養基，放入溫箱內培養。但培養12~24h后必須換新鮮的培養基，移除死細胞。

        好啦，那關于細胞冷凍與復蘇的注意事項我就講到這里啦，不同的冷凍方法和一些特殊細胞的冷凍步驟也有出入，本文給大家介紹的是比較通用適合大部分細胞凍存與復蘇的操作注意事項，如果您還有更多的操作技術問題或有細胞實驗外包和細胞質粒購買的需求歡迎留言，普拉特澤生物細胞實驗平臺竭誠為您服務~

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