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        細胞衰老實驗的操作步驟由普拉特澤生物帶領大家一起學習！衰老細胞時的形態變化主要表現為形狀變大、變平、胞核增大、核膜內陷、染色質固縮、胞內溶酶體變多等，普拉特澤生物——細胞實驗平臺專業承接細胞衰老實驗的外包與代測服務，可以檢測貼壁細胞、懸浮細胞、以及組織切片的細胞衰老情況，下面我們就以這三種樣本為例，一個一個來看看他們進行細胞衰老實驗的操作步驟！

        首先是貼壁細胞衰老檢測的實驗步驟：

        1、吸除培養基，用PBS（或試劑盒里的細胞清洗液）洗滌細胞3遍。

        2、吸取清洗液，加入固定液室溫固定細胞15min。

        3、吸去固定液，用PBS9（或試劑盒里的細胞清洗液）洗滌細胞3次。

        4、吸去清洗液，加入37℃預熱的染色液。37℃孵育3-16h或直至細胞呈現藍色，可用保鮮膜封住培養皿以防止染色液的蒸發。

        5、在光學顯微鏡下觀察和計數，呈現藍色的細胞為衰老細胞。如果不能及時觀察，可吸去染色液后加PBS置于4℃，加入封邊劑封片后4℃長期保存。

        第二個就是懸浮細胞衰老檢測的實驗步驟：

        1、收集細胞：離心收集待測的懸浮細胞，用PBS或細胞清洗液洗滌細胞三遍。

        2、洗去清洗液：離心后吸去清洗液，加入固定液懸浮細胞，室溫搖床上固定細胞15 min。

        3、洗去固定液：用PBS或細胞清洗液洗滌細胞三次，再吸去清洗液。

        4、加入37℃預熱的染色液至懸浮細胞，37℃孵育3-16h或直到細胞呈現藍色，最好把整個片子浸泡在染色液中，然后用保鮮膜封住器皿以防止染色液的蒸發。

        5、取染好色的細胞，添加到載玻片或六孔板內。

        6、在光學顯微鏡下觀察和計數：呈現藍色的細胞為衰老細胞。如果不能及時觀察，可吸去染色液后加PBS置于4℃，加入封邊劑封片后4℃長期保存。

        最后就是組織切片衰老檢測的操作步驟：

        1、石蠟切片先按照常規的方法進行脫蠟和水化處理，如果樣本是冰凍切片可以直接進行下一步。石蠟且切片的脫蠟我們可以參考以下的脫蠟步驟：

        （1）脫蠟前，將組織切片于 60℃恒溫箱中烘烤2.5h；

        （2）組織切片置于二甲苯中浸泡15 min；

        （3）更換二甲苯后再浸泡15 min；

        （4）無水乙醇中浸泡5 min；

        （5）90%乙醇中浸泡5 min；

        （6）80%乙醇中浸泡5 min；

        （7） 70%乙醇中浸泡5 min；

        2、加入適當固定液，以充分覆蓋住組織為宜，室溫固定細胞15min

        3、吸去固定液，用PBS（或試劑盒里的細胞清洗液）洗滌細胞3次。

        5、在光學顯微鏡下觀察和計數：呈現藍色的細胞為衰老細胞。如果不能及時觀察，可吸去染色液后加PBS置于4℃，加入封邊劑封片后4℃長期保存。

        好啦！用β-半乳糖苷酶法來檢測貼壁細胞、懸浮細胞、組織切片實驗具體操作方法咱們就解釋到這里啦，如果您有不同的意見或者更好的操作歡迎留言跟我們分享，如果您有細胞衰老實驗外包的需求，請一定認準——普拉特澤生物！