細胞增殖檢測方法匯總【附視頻教程】
來源/作者:普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
細胞增殖檢測方法匯總由普拉特澤生物細胞實驗平臺總結分享,文末附上細胞增殖檢測視頻教程供大家復盤學習。上篇我們介紹了什么是細胞增殖,簡單梳理了一下細胞增殖的有絲分裂、無絲分裂、減數分裂三種分裂形式,忘記了回去復習哦,今天實驗平臺的技術為大家總結的是細胞增殖檢測的實驗方法。
細胞增殖檢測法(一):直接計數法
這是一種非常簡單的檢測方法,我們可以利用計數板或技術儀得出細胞數目然后對數目進行比較即可。其缺點是不適合評估特定亞群、和數量較多的細胞計數。
細胞增殖檢測法(二):直接Brdu/EdU檢測法
Brdu中文全名5-溴脫氧尿嘧啶核苷,為胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活體注射或細胞培養加入,而后利用抗Brdu單克隆抗體,ICC染色,顯示增殖細胞。同時結合其它細胞標記物,雙重染色,可判斷增殖細胞的種類,增殖速度,對研究細胞動力學有重要意義。
細胞增殖檢測法(三):直接MTT檢測法
MTT檢測法主要反映細胞的能量代謝,是檢測細胞增殖活力的一種簡便準確的方法,其原理是在活細胞生長和增殖過程中,線粒體內的脫氫酶可將黃色的MTT分解成蘭紫色的甲(Formazan),生成的甲瓚的多少與細胞的數量和細胞的活力成正比。
細胞增殖檢測法(四):CCK-8檢測法
CCK-8就是MTT的升級版,CCK-8細胞活性檢測試劑中含有WST-8——一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以為線粒體內的脫氫酶驗明正身,在脫氫酶作用下,還原生成橙黃色的甲瓚產物。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。用酶聯免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。
細胞增殖檢測法(五):直接3H-TdR滲入法
胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA特有的堿基,也是DNA合成的必需物質。用同位素3H標記TdR即3H-TdR作為DNA合成的前體能摻入DNA合成代謝過程,那之后的每一條新合成的DNA雙鏈像被安裝了GPS定位器一樣,都能被液體閃爍計數器檢測到,通過測定細胞的放射性強度,可以反映細胞DNA的代謝及細胞增殖情況。優點:3H-TdR摻入法敏感性高,客觀性強,重復性好。缺點:需一定設備條件:液體閃爍計數器,這玩意不便宜,同時還存在放射性核素污染問題,真是傷錢包又傷身體。
細胞增殖檢測法(六):核抗原Ki‐67染色法
Ki-67染色,研究人員可以評估處于細胞周期所有活躍期的總增殖細胞的百分比。科研人員可以借此觀察藥物或未知化合物的刺激效應或抗增殖效應??捎妹庖呓M織化學技術或流式細胞術檢測。
細胞增殖檢測法(七):CFSE檢測法
羥基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺脂(CFSE)是一種可穿透細胞膜的熒光染料,可以不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上,是一種良好的細胞標記物。其檢測法原理:CFSE進入細胞后,可以不可逆地與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上。當細胞分裂時,CFSE標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中,因此其熒光強度是在親代細胞的一個增殖的細胞群中,各連續代細胞的熒光強度呈對遞減,利用流式細胞儀在488nm激發光和熒光檢測通道可對其進行分析。
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