質粒轉化后，涂板總是糊成一片是怎么回事
2025-05-28 16:22:43
來源/作者：普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
是不是有不少小伙伴做分子實驗的時候是不是經常被質粒轉化后的涂板結果搞得頭大？每次滿心期待地打開培養箱，看到的卻是平板上菌落糊成一片，根本沒法挑單克隆，這心情簡直比坐過山車還刺激。今天就來和大家嘮嘮質粒轉化后涂板糊成一片可能的原因和解決辦法！普拉特澤生物一起帶大家理解理解。
糊板原因解析
1.感受態細胞質量不佳：感受態細胞就像是運輸質粒的貨車，如果貨車本身質量不好，那質粒就很難順利到達細胞內。感受態細胞活性低或者保存不當或存在雜菌污染，都會導致轉化效率大大降低，涂板時就可能出現菌落分布不均或者糊成一片的情況。
2.質粒濃度過高：轉化時質粒濃度并非越高越好！如果質粒濃度過高，轉化時進入細胞的質粒數量過多，就會讓細胞“不堪重負”，長出來的菌落就會密密麻麻地擠在一起，看起來就像糊成了一片。
3.涂板菌液量過多：菌液量過多會使平板上接種的細菌數量遠超正常水平。在適宜的培養條件下，細菌會大量繁殖，導致菌落之間相互擠壓、重疊。原本可以清晰分辨的單個菌落，由于生長空間不足，會緊密相連，形成一片模糊的區域，難以挑取單克隆進行后續實驗。
4.轉化操作不當：轉化過程中，冰浴時間不夠、熱激溫度或時間不準確、復蘇培養時間過長或過短等，都可能影響轉化效率。比如冰浴時間太短，細胞可能還未充分吸收質粒就被；熱激溫度過高或時間過長，又會把細胞“燙死”，這些都會導致涂板結果不理想。
5.培養基或操作過程中染菌：培養基滅菌不徹底或者涂布過程中存在污染會導致雜菌大量產生。
6.固體培養基忘記加抗生素。
解決方法
1.感受態細胞質量不佳：更換感受態細胞，確保感受態的質量和純度合格，嚴感受態細胞儲存于-80℃，避免反復凍融
2.質粒濃度過高：調整質粒濃度，一般50-100ng/ul即可
3.涂板菌液量過多：減少涂板菌液量，涂板完成后靜置幾分鐘再倒置培養4.轉化操作不當：轉化過程中42℃熱激45-60S即可復蘇（加入無抗LB搖菌）時間大于1小時
5.培養基或操作過程中染菌固體培養基忘記加抗生素或抗生素失效：重新配置培養基，確保實驗過程無菌操作。
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