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CCK8實驗新手教程【快速入門】

2024-06-05 14:43:02

來源/作者:普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺

    CCK8實驗作為一種常用的細胞增殖檢測方法,因其簡便、快速和準確的特點而備受研究者們的青睞,前兩篇普拉特澤生物總結了CCK8檢測實驗報告(一)、CCK8檢測實驗報告(二),本文將為大家提供一份CCK8實驗的新手教程,幫助科研小白快速入門,輕松掌握細胞增殖檢測技巧。

上篇:CCK8檢測實驗報告(一)

中篇:CCK8檢測實驗報告(二)

鏈接奉上,那現在我們來接著總結:

本文將為你提供一份CCK8實驗的新手教程,幫助你快速入門,輕松掌握細胞增殖檢測技巧。

一、實驗原理及準備

CCK8實驗,全稱為Cell Counting Kit-8實驗,是一種基于WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。WST-8在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的脫氫酶還原生成具有高度水溶性的橙黃色甲臜產物,顏色的深淺與細胞的增殖成正比,與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450nM波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。

在開始實驗前,我們需要準備以下材料:CCK8試劑、細胞培養基、細胞懸液、96孔板、酶標儀等。同時,確保實驗環境干凈整潔,細胞培養條件適宜。

二、實驗步驟

①細胞接種:根據實驗需要,將細胞懸液接種到96孔板中,每孔加入適量的細胞懸液,確保細胞分布均勻。

②細胞培養:將接種好的96孔板放入細胞培養箱中,根據細胞類型和實驗需求設置適當的培養條件,如溫度、濕度、CO2濃度等。

③CCK8試劑加入:在設定的時間點,取出96孔板,向每孔中加入適量的CCK8試劑。注意避免產生氣泡,以免影響實驗結果。

④孵育:將加入CCK8試劑的96孔板放回細胞培養箱中,繼續孵育一定時間。孵育時間的長短應根據細胞類型和實驗需求進行調整。

⑤測定光吸收值:孵育結束后,取出96孔板,使用酶標儀在450nM波長處測定每孔的光吸收值。記錄數據并進行分析。

三、實驗注意事項

→細胞接種密度要適中,避免細胞過密或過疏影響實驗結果。

→CCK8試劑加入量要準確,避免對實驗結果造成干擾。

→孵育時間要根據細胞類型和實驗需求進行調整,以獲得最佳的實驗結果。

→實驗過程中要注意無菌操作,避免細胞污染。

四、實驗結果解讀

根據測定的光吸收值,我們可以繪制細胞增殖曲線或計算細胞毒性率。通過對比不同實驗組的數據,可以分析藥物對細胞增殖的影響、不同細胞株的生長差異等。

五、總結

CCK8實驗作為一種簡便、快速的細胞增殖和毒性檢測方法,在生物醫學研究領域具有廣泛的應用前景。通過本文的介紹,相信新手們已經對CCK8實驗有了初步的了解。只要掌握正確的實驗步驟和注意事項,大家都能輕松上手,為科研工作提供有力的支持。

冰凍三尺,非一日之寒,普拉特澤致力于幫助廣大科研工作者解決CCK8實驗中的各方面問題,不但授人以魚,亦授人以漁。