細胞增殖檢測方法介紹之MTT法和CCK8法——MTT/CCK8細胞增殖檢測外包
2022-03-04 17:19:53
來源/作者：普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
細胞增殖檢測常用方法MTT法和CCK8法詳細介紹由普拉特澤生物為大家總結分享。普拉特澤旗下的細胞實驗平臺根據多年來承接的細胞增殖檢測外包實驗經驗，給大家介紹兩個我們在檢測細胞增殖時時最常用的實驗方法——MTT法和CCK8法，同學們打起精神來，這兩種檢測方法應用廣泛值得學習哦。如果有需要用MTT和CCK8法檢測細胞增殖實驗外包的需求，請關注我們哦。
首先我們來看看細胞增殖檢測中的MTT法：
MTT法檢測原理：MTT法又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲臜，用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。
局限性： 由于MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶于水，需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加，也會對實驗結果的準確性產生影響，而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。
MTT檢測法注意事項：
1、MTT法只能用來檢測細胞相對數和相對活力，但不能測定細胞絕對數。在用酶標儀檢測結果的時候，為了保證實驗結果的線性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范圍內。
2、MTT一般最好現用現配，過濾后4℃避光保存兩周內有效，或配制成5mg/mL保存在-20℃長期保存，避免反復凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分裝在EP管里，用的時候現配，直接往培養板中加，尤其當MTT變為灰綠色時就絕對不能再用了。
3、MTT有致癌性，用的時候小心,有條件最好帶那種透明的薄膜手套.配成的MTT需要無菌，MTT對菌很敏感；往96孔板加時不避光也沒有關系，畢竟時間較短，或者可以把操作臺上的照明燈關掉。
4、配制MTT時用PBS溶解,也有人用生理鹽水配，60℃水浴助溶。
那現在我們再來來看看細胞增殖檢測中的CCK-8法：
CCK-8法檢測原理：CCK-8檢測實際是基于CCK-8試劑盒的細胞檢測方法。原理和MTT相似，都是由于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜，不同之處在于CCK-8法生成的藍紫色結晶甲臜（Formazan）是水溶的。故較MTT法減少了吸出培養液在加入有機溶劑溶解這一步，也算是MTT法的優化。相對與MTT ,CCK8試劑盒使用方便，即開即用；減少了實驗過程重復性；減小了對細胞的毒性。另一方面，較于MTT法實驗經費也會貴不少。
CCK-8法注意事項：
1. CCK-8的培養時間一般為1-4小時，但在培養30分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度，根據細胞種類而定，需要摸索條件，CCK-8的最佳反應時間以具體顯色的最佳時間為準。
2. 使用 96 孔板進行檢測時，如果細胞培養時間較長，一定要注意蒸發問題。一方面，由于 96 孔板周圍一圈最容易蒸發，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的 PBS 、水或培養液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培養箱內水源的地方，以緩解蒸發。
3. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應，所以還原劑 (例如一些抗氧化劑) 會干擾檢測，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設法去除。用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。
4. 加入藥物中如含有金屬，對CCK-8顯色有影響。終濃度為1 mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制 5% 、15% 、90% 的顯色反應，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話，將會100%抑制。
5. 培養基中的酚紅不會影響實驗結果，酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。
6. 本產品可以檢測 ，但不能檢測酵母細胞。向 100 μL 培養液中加入 10 μL CCK-8 溶液，并培養 1-4 小時或過夜。
7. CCK-8 試劑對細胞的毒性非常低。它和活細胞內的脫氫酶持續反應使溶液顏色不斷加深，OD 值不斷增加 (注: 活細胞內的脫氫酶是持續產生的) 。
8. 要測定細胞的具體數量，建議同時做標準曲線。
9. 建議采用多通道移液器，以減小平行孔間的差異。
好啦，那這兩個關于細胞增殖檢測的實驗方法同學們看懂了嗎？MTT法和CCK8法更想學哪個呢？小編的建議是成年人的世界不需要選擇，全都要！如果您不只有學習的需求，還有細胞增殖實驗外包的需求，請認準普拉特澤細胞實驗平臺，您科研路上一個靠譜兒的大兄弟！
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