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Co-IP免疫共沉淀實驗介紹【附視頻介紹】

2022-04-15 13:25:53

來源/作者:普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺

   大家好,今天我們來學習一個新的實驗——免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,也就是我們常說的Co-IP實驗。本文由普拉特澤生物分子檢測平臺總結分享,普拉特澤專業承接包括coip在內的各項分子互作生物實驗代做服務,同時還開設了線上下常用實驗操作技能培訓班——《春風學院》,文尾附上coip免疫共沉淀實驗操作視頻供大家學習,一起來看看吧!

   Co-IP是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。

Co-IP的原理當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內結合的蛋白質Y也能沉淀下來。Co-IP確定的存在相互作用關系,但這種相互作用并不能確定使用直接作用還是間接作用。


   Co-IPChIPRIPPull down作為常見的分子互作驗證方法。它們可以從檢驗的出發點來區分:Co-IPChIPRIP是利用已知的蛋白檢測體內相關蛋白、DNARNA,并通過蛋白抗體免疫沉淀分離目標蛋白、DNARNAPull down則是根據已知RNARNA pull down)或者已知蛋白(GST pull down)體外檢驗相關蛋白。Co-IP主要用于檢測蛋白質與蛋白質之間相互作用,是IP實驗的一種擴展, 基于IP反應的潛力,在樣品溶液中捕獲和純化主要目標(抗原等)及通過天然相互作用靶標結合的其他的大分子。此外,還可以利用Co-IP來確定在不同條件下的蛋白質相互作用。

   那么Co-IP實驗作為科學研究蛋白相互作用力的經典方式,有哪些優缺點呢?

   優點:

   1)相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的,處于天然狀態;

   2)蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的,可以避免人為的影響;

   3)可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。

   缺點:

   1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質-蛋白質相互作用;

   2)兩種蛋白質的結合可能不是直接結合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;

   3)必須在實驗前預測目的蛋白是什么,以選擇最后檢測的抗體,所以,若預測不正確,實驗就得不到結果,方法本身具有冒險性。

   4)靈敏度沒有親和色譜高。

   好啦,關于Co-IP免疫共沉淀實驗的介紹就講到這里啦,了解小編的都知道小編介紹實驗的四部曲,實驗簡介——實驗步驟——注意事項——常見問題,所以小白們先對實驗有一個簡單了解,之后的實操學習才會更輕松哦,想先大家一步學習了解更多coip實驗的同學歡迎點擊:CO-IP 理論+實操》先一步學習哦!