巨噬細胞原代提取
2024-10-22 14:53:17
來源/作者：普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
大家好！今天普拉特澤生物繼續跟大家一起學習——巨噬細胞原代提取巨噬細胞原代提取是細胞生物學和免疫學研究中常用的一種技術，用于從生物體內直接獲取具有生物活性的巨噬細胞。
以下是以小鼠為例的巨噬細胞原代提取方法的詳細步驟和注意事項：
一、實驗準備
?●實驗動物?：選擇SPF級小鼠，確保實驗動物的健康狀態。
?●試劑準備?：
①細胞培養基（如RPMI 1640、DMEM等）
②胎牛血清
③雙抗（青霉素和鏈霉素）
④巰基乙酸鹽肉湯（或其他巨噬細胞刺激物）
⑤PBS（磷酸鹽緩沖液）
⑥紅細胞裂解液（如需要）
?●器械準備?：
①一次性注射器
②手術器械（如手術剪、眼科鑷、眼科剪等）
③離心管
④細胞培養板或培養瓶
二、巨噬細胞原代提取步驟
●腹腔巨噬細胞提取：
⒈?腹腔注射?：在實驗前三天，每天向小鼠腹腔注射1mL的3%巰基乙酸鹽肉湯，以刺激腹腔內巨噬細胞的增殖。
⒉小鼠處理?：
⒊脫頸處死小鼠后，用75%酒精浸泡3-5分鐘進行消毒。
⒋將小鼠仰臥固定于解剖板上，剪開腹部皮膚暴露腹膜。
?●腹腔灌洗?：
⒈用注射器吸取預冷的PBS（或含雙抗的細胞培養基）5mL，緩緩注入小鼠腹腔內。
⒉輕揉小鼠腹部數次，使液體在腹腔內充分流動。
⒊靜置3-5分鐘后，用注射器抽取腹腔灌洗液至離心管中。
?●細胞分離?：
⒈將收集的腹腔灌洗液進行離心（1000 rpm，5-10分鐘），去除上清液。
⒉用含雙抗的細胞培養基重懸細胞沉淀，并計數。
?●細胞培養?：
⒈將細胞接種至細胞培養板或培養瓶中，置于37℃、5% CO2培養箱中孵育2-4小時，使巨噬細胞貼壁。
⒉棄去未貼壁的細胞，更換新的培養基繼續培養。
●骨髓巨噬細胞提?。ê喴f明）
⒈骨髓巨噬細胞的提取相對復雜，通常涉及以下步驟：
⒉小鼠處理?：處死小鼠后，去除腿部皮膚和肌肉，暴露股骨和脛骨。
⒊骨髓沖洗?：用注射器吸取含雙抗的細胞培養基沖洗骨髓腔，收集骨髓細胞。
?⒋細胞分離與培養?：通過密度梯度離心、紅細胞裂解等方法去除雜質細胞，將骨髓細胞接種至培養瓶中，在含有特定細胞因子（如MCSF）的培養基中培養，誘導其分化為巨噬細胞。
三、注意事項
?⒈無菌操作?：整個操作過程中需嚴格遵守無菌操作規范以防止污染。
⒉細胞活性?：確保使用的試劑和培養基適合巨噬細胞的生長和功能維持。
⒊培養條件?：控制培養箱的溫度、濕度和CO2濃度等參數以提供適宜的生長環境。
⒋細胞觀察?：定期觀察細胞的生長狀態和形態變化以便及時調整培養條件。
以上是以小鼠為例的巨噬細胞原代提取方法的簡要介紹，具體步驟可能因實驗條件和需求而有所調整。
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