RIP檢測實驗流程
2023-04-10 15:18:43
來源/作者：普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
大家好！今天普拉特澤生物繼續帶大家一起學習新實驗——RIP檢測實驗，RIP檢測實驗是應用于蛋白與RNA互作關系的重要參考，普拉特澤生物病理實驗平臺長期為大家提供RIP檢測實驗代做外包服務，本文跟大家分享的RIP檢測實驗流程：
下面是一個基本的RIP實驗流程：
1. 細胞培養：將要檢測RNA結合蛋白的細胞株進行培養，并保持其生長狀態。
2. 噬菌體構建：確定目標RNA序列，設計并構建合適高度含量同性的噬菌體，將復制RNA序列融進其中，成為構建好的“靶”噬菌體。
3. 交聯：利用化學方法將核糖核酸蛋白質交聯到RNA上。
4. 提取RNA：提取交聯后的RNA樣品，對RNA進行質量和純度測試，并進行相應處理。
5. 包埋：將RNA在富含甲醛固定后包埋入瓊脂中。
6. 免疫沉淀：通過特異性抗體與待篩選的蛋白形成復合物，并借助蛋白A/G或蛋白L瓊脂糖等機制使復合物沉淀下來。
7. RNA分離：通過可逆交聯斷裂，將沉淀下的蛋白與RNA分離。
8. PCR擴增：使用RT-qPCR、microarray或序列相分析技術，分析RNA序列，并確定RNA是否與目標蛋白結合。
9. 數據解析：對實驗過程中得到的數據進行整理、統計和解釋，試圖推斷RNA與蛋白質之間的相互作用關系。
總體來說，RIP檢測實驗需要在保持細胞生長狀態的前提下進行一系列化學和操作步驟，并借助特定抗體和瓊脂糖將RNA結合蛋白和RNA進行沉淀、分離和分析處理，以檢測待篩選蛋白與RNA之間的相互作用
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