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RIP檢測樣本制備注意事項【RIP檢測外包】

2022-12-19 13:54:21

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺

        大家好!今天普拉特澤生物跟大家一起學(xué)習(xí)的是RIPCHIPCO-IP等實驗樣本取樣與準(zhǔn)備的各種注意事項,普拉特澤生物分子檢測中心承接免疫共沉淀等分子互做實驗幾百例,積累大量的實操經(jīng)驗,我們來一個個看:

        一、樣本準(zhǔn)備前注意事項

        1取樣的代表性

        所采集的樣本應(yīng)該通過嚴(yán)格的細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)等相關(guān)鑒定,因為這關(guān)系 到實驗最終結(jié)果是否具有科學(xué)意義,所以客戶須根據(jù)實驗?zāi)康脑O(shè)計相關(guān)科學(xué)取樣 方案和取樣步驟。

        2取樣的準(zhǔn)確性

        正常組織樣本中不能含有病變組織,而病理組織樣本中也不可以夾帶有正常組織。

        在條件允許的前提下,爭取做到實驗組與對照組的樣本在取材時間、部位、處理條件等方面盡可能保持一致,否則可能會影響實驗結(jié)果的重復(fù)性和可信度。代表性樣本的各種特征數(shù)據(jù)必須被準(zhǔn)確記錄,并按要求(低溫、迅速)采集、制 備、貯存、運輸進(jìn)行實驗處理。

        3取樣的重復(fù)性

        生物學(xué)重復(fù)的取樣應(yīng)盡量減少重復(fù)間樣品的差異。在條件允許的前提下,做到重復(fù)樣本在取材時間、部位、處理條件等方面盡可能保持一致,可以使用同一個體

        的作為重復(fù)的盡量選用同一個體,不能使用同一個體的應(yīng)保證父母本、雌雄(性別)、年齡相同,否則可能會影響實驗結(jié)果的重復(fù)性和可信度。

        4取樣的及時性

        樣本質(zhì)量是影響實驗結(jié)果的最關(guān)鍵因素,因此用于研究的實驗樣本,在采集、貯存、運輸和制備的過程中盡可能地做到迅速,最大限度的縮短從樣本采集到實驗 的時間。

        5取樣的低溫性

        所取樣本離體后,經(jīng)快速清洗和標(biāo)記等處理后,應(yīng)立即投入液氮中速凍至少 30 分鐘,之后保存于-80℃冰箱或者干冰中,確保在實驗操作前樣品始終處于-80℃,以避免蛋白的降解。

        二、RIP檢測樣本取樣方法

        1、組織、細(xì)胞、微生物等樣本準(zhǔn)備與保存方法

        1)動物組織

        A. 取下新鮮組織,應(yīng)剔除結(jié)締組織和脂肪組織等非研究所需的組織類型;

        B. 迅速用預(yù)冷的 0.9%生理鹽水漂洗將組織表面的殘留血液沖洗干凈;

        C. 如果組織體積較大,盡量將組織切成長寬高均≤0.5cm 的小塊(即黃豆大小);

        D. 將處理好的組織樣本混合均勻后保存于 10 ml 或更大體積的旋蓋凍存管中,準(zhǔn)確標(biāo)記;

        E. 迅速置于液氮中冷凍 30 分鐘,然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中保存;

        F.運送方式:將凍存管置于 50ml 離心管中或密封性好的塑料袋中,干冰運輸。

        2)植物組織

        A. 從植物體上,取下新鮮組織。大田或野外獲取的材料,取材后需將材料表面的灰塵或泥土沖洗干凈,吸干。

        B. 如果組織體積較大,應(yīng)盡量將組織剪切成小塊,然后將組織放入 10ml 或更大體積的凍存管中,或者使用錫箔紙包嚴(yán)后放入自封袋,準(zhǔn)確標(biāo)記;

        C. 迅速置于液氮中冷凍 30 分鐘,然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中保存;

        3)腫瘤組織

        A. 對腫瘤組織的取材,應(yīng)盡可能準(zhǔn)確地判定腫瘤和正常組織,如果有可能請根據(jù)冰凍切片報告的結(jié)果來判斷要進(jìn)行研究的取材部位,腫瘤組織應(yīng)將周圍的正常組織切除干凈(正常組織也應(yīng)將周圍的腫瘤組織切除干凈);

        B. 離體后請立即分割組織,約 2-3 mm 厚,然后將組織放入 2.0 mL 或更大體積旋蓋凍存管中;

        C. 迅速置于液氮中冷凍 30 分鐘,然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中保存;

        D. 運送方式:將凍存管放置于 50ml 離心管中或密封性好的小塑料袋中,干冰運輸;

        4)細(xì)胞樣品

        A.貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液,并用 PBS 緩沖液(無 Rnase 配制)清洗兩次,3,000 rpm/ min/ 4 ℃離心 5min,倒盡上清,準(zhǔn)確標(biāo)記;

        B.迅速置于液氮中冷凍 30 分鐘,然后轉(zhuǎn)移至-80℃或液氮中保存;

        C. 運送方式:將凍存管放置于 50ml 離心管中或密封性好的小塑料袋中,干冰運輸;

        好啦,那關(guān)于RIP檢測的樣本準(zhǔn)備注意事項咱們就說到這里啦,如果您也正在準(zhǔn)備做RIP檢測的話可以參考文中RIP檢測樣本的注意事項,RIP檢測代做或外包的需求歡迎隨時留言咨詢普拉特澤生物~