雙熒光素酶報告基因實驗原理與簡單介紹【新手入門】
2022-03-23 17:26:04
來源/作者：普拉特澤-生物醫學整體課題外包平臺
雙熒光素酶報告基因實驗簡介與原理由普拉特澤生物技術人員生物為大家總結分享，普拉特澤生物憑借承接多年的雙熒光素酶報告基因實驗練就了一身過硬的實驗操作技能，有了現在雙熒光素酶實驗快、技術高、周期短的分子檢測平臺，為廣大生物醫學研究者提供雙熒光素酶實驗外包等幾十種分子互作實驗外包。本文我們就從雙熒光素酶的實驗的簡介和原理來給大家詳細解釋。
熒光素酶（英文名稱：Luciferase）是自然界中能夠產生生物熒光的酶的統稱，其中最有代表性的是一種學名為Photinus pyralis的螢火蟲體內的熒光素酶。在相應化學反應中，熒光的產生是來自于螢光素的氧化，有些情況下反應體系中也包括三磷酸腺苷(ATP)。沒有熒光素酶的情況下，螢光素與氧氣反應的速率非常慢，而鈣離子的存在常常可以進一步加速反應（與肌肉收縮的情況相似）。
雙熒光素酶報告基因用于實驗系統中作相關的或成比例的檢測，通常一個報告基因作為內對照，使另一個報告基因的檢測均一化。檢測基因表達時雙報告基因通常用來瞬時轉染培養細胞，帶有實驗報告基因的載體共轉染帶有不同的報告基因作為對照的第二個載體。通常實驗報告基因偶聯到調控的啟動子，研究調控基因的結構和生理基礎。報告基因表達活力的相對改變與偶聯調控啟動子轉錄活力的改變相關，偶聯到組成型啟動子的第二個報告基因，提供轉錄活力的內對照，使測試不被實驗條件變化所干擾。
通過這種方法，可減少內在的變化因素所削弱的實驗準確性，比如，培養細胞的數目和活力的差別,細胞轉染和裂解的效率。理想的雙報告基因方法應該使用戶能夠以螢火蟲熒光素酶所具有的速度,靈敏和線性范圍對同一樣品中的兩個報告基因同時測定。
這在傳統的報告基因，如CATB-Gal和GUS是不可能的，由于它們測試化學,處理要求所固有的局限。相反，結合螢火蟲(Photinuspyralis)和海洋腔腸(Renilla reniformis)雙熒光素酶的系統可滿足這些要求，在單管中完成這些測試。
雙熒光素酶報告基因系統實驗原理為：雙螢光素酶報告基因載體上含有兩種熒光素酶基因，分別是螢火蟲熒光素酶基因和海腎熒光素酶基因，二者沒有序列同源性，并且分別對應各自的反應底物，消除了實驗過程中的干擾。在檢測的過程中，由于miRNA主要作用于靶基因的3'UTR，所以將靶基因mRNA的3'UTR和定點突變靶點的片段插入至雙熒光素酶基因載體下游的多克隆位點(MCS)中，并將構建好的重組載體質粒與miRNA或miRNA 模擬物(miRNA mimics)共轉染到工具細胞中，檢測螢光素酶的活性變化，從而可以定量反映miRNA是否對潛在靶基因起作用。以此來確定轉染載體中是否含有miRNA的靶位點。
好啦，關于雙熒光素酶報告基因實驗基礎知識和原理的介紹就到這里啦，有更多不懂的同學歡迎留言咨詢哦，更有需要雙熒光素酶實驗外包的同學歡迎聯系。
——關于我們——
普拉特澤自建3000平米的GMP級實驗室
擁有七個大型實驗平臺、碩博士學歷技術團隊100余人
病理實驗平臺、動物實驗平臺、流式檢測平臺、分子檢測中心、細胞病毒中心,三大資源庫（細胞、組織、質粒）
秉承“死磕真實實驗”學術精神提供各項優質實驗服務
歡迎您交流咨詢
電話：400-691-6686
在線時間：8:00-24:00
微信關注公眾號
湘公網安備